Coelenterazine h 腔腸素h

【溫馨提示】：見我司提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產品專題。

產品簡介：

腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發現的一種發光基團（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲熒光素酶（Obelia luciferase），和發光蛋白包括水母發光蛋白（Aequorin）的構成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產生高能量的中間產物，在此過程中發射藍色光，光波長在450~480nm。而甲蟲（或螢火蟲）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg²⁺的存在才能同時發光，光波長在550-570nm。正由于生物發光信號和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯合用于多重轉錄報告基因研究，或用作Fluc系統內螢火蟲熒光素酶轉染的內參。

腔腸素應用甚是廣泛，包括：1）活細胞或組織的鈣離子檢測；2）細胞或組織的超氧化物和過氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學發光檢測；3）基因報告基因檢測；4）動物活體檢測；5）ELISA和生物發光共振能量轉移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）。

腔腸素h（Coelenterazine h，CTZ-h）是天然腔腸素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脫羥基衍生物。CTZ-h形成的水母發光蛋白復合物比CTZ-native形成的水母發光蛋白復合物的熒光強度高10倍以上（最大發射波長~466nm，半衰期為0.6-1.2sec）。CTZ-h形成的水母發光蛋白復合物比天然發光復合物對鈣離子靈敏度更高，是一種檢測鈣離子濃度微小變化的實用探針。另外，CTZ-h是海腎熒光素酶（Renilla luciferase，Rluc）的底物，適用于體內外報告基因分析。 

產品特性：

1） CAS NO：50909-86-9

2） 化學名：2,8-dibenzyl-6-(4-hydroxyphenyl)imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one; Imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one, 6-(4-hydroxyphenol)-2,8-bis(phenylmethyl);

3） 同義名：h-Coelenterazine; h-CTZ; 2-Deoxycoelenterazine 2-脫氧腔腸素; 2-(4-Dehydroxy) coelenterazine；Luciferin (Renilla) 海腎熒光素；

4） 分子式：C26H21N3O2

5） 分子量：407.5 g/mol

6） 純度：>98%

7） 外觀：黃色固體

8） 溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）化學結構圖：

保存條件: 

-20℃干燥避光保存，且保存于惰性氣體內。至少一年有效。

產品使用：

一、 腔腸素工作液制備

【有關腔腸素溶解的注意事項】：

1） 腔腸素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔腸素的水溶性相對比較低，一般情況需先將腔腸素溶于酸化的醇類溶劑配成相對高濃度的母液，然后再用水溶性緩沖液稀釋到需要的工作濃度，現配現用。

2） 腔腸素在溶液中的穩定性比較低，最好于正式實驗前才配制溶液（包括高濃度母液）。但若實際要求，必須保存母液，目前來說最穩定的溶劑是丙二醇，往內加入少量L-抗壞血酸，β-巰基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能維持其還原態。不過，還原劑可能會減低氧化腔腸素（氧化為Coelenteramide）的動力學速率。也有可能破壞熒光素酶活性。而凍存在醇類溶劑中可能引起腔腸素沉淀，實際取決于溶液濃度。當然，可通過加熱50-60℃，使得沉淀重新溶解。必須確保無可見沉淀，或在實驗前（特別是活體動物實驗）離心去沉淀。

1.1 腔腸素母液制備

將低溫保存的腔腸素粉末置于室溫回溫至少20min，低速離心后。往500μg腔腸素h內加入102μl 酸化的醇溶液（100%甲醇或100%乙醇中含有20μl/ml 3N或6N HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔腸素母液。也可根據下游應用配制成適宜濃度的腔腸素母液（1~5mg/ml）。≤-20℃（最好-80℃）分裝避光保存，可能會有少量活性的喪失，約保存1~3周。若存放在惰性氣體內可相對延長保存周期。

1.2 腔腸素工作液制備

直接用去氣蒸餾水（degased distilled water），PBS或者其他類型生理緩沖液（pH 6.6-7.2）稀釋，選擇的稀釋緩沖液需考慮到與酶系統配合。工作液需現配現用。比如，可直接用不含Ca²⁺/Mg²⁺的PBS將12 mM的儲存液稀釋到2mM（~1 mg/ml）的工作液，+4°C避光短暫存放。最佳反應液濃度請根據下游應用來調整。

附錄1 天然腔腸素及其衍生物的光譜特性：

附錄2天然腔腸素及其衍生物的應用差異：

注意事項：

1.      腔腸素h（Coelenterazine h， CTZ-h）最好以完全凍干粉的狀態保存在惰性氣體內，密封后置于-20℃或-70℃長期避光保存。管內即使有微量空氣，也會隨著時間慢慢氧化腔腸素使其活性喪失。由此，導致不同組間的定量結果可能顯得不可靠，數據可比性不高。

2.      腔腸素h（Coelenterazine h， CTZ-h）不建議以儲存液的形式保存，最好于實驗前配制新鮮的溶液。不建議將配好的腔腸素h溶液儲存在-20℃或-70℃，因其具有一個高能量的二氧雜環丁酮環形結構，即使在低溫條件下都會自發降解。若是必須配成液體儲存液，請按照操作步驟一、腔腸素工作液制備執行。

3.      體內動物實驗，推薦使用我司特別開發和優化的注射用腔腸素h（Injectable h-Coelenterazine）（貨號：NBS5921）或注射用天然腔腸素（Injectable native Coelenterazine）（貨號：NBS5919）。

4.      發光蛋白與熒光素酶是完全不同的，比如腔腸素h（CTZ-h）適合用作海腎熒光素酶（Rluc）的底物，但不適合用作分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）的底物。天然腔腸素（CTZ-native）是唯一適合分泌型膜錨定熒光素酶的一種報告基因底物。

5.      商業化腔腸素的種類繁多，有天然腔腸素，以及各種腔腸素衍生物（比如，腔腸素h，腔腸素400a，腔腸素e，腔腸素f，腔腸素hcp）。它們對鈣離子的親和力，光譜特性，以及應用傾向上會有差異，詳見附錄1—天然腔腸素及其衍生物的光譜特性，附錄2—天然腔腸素及其衍生物的應用差異選擇適當的產品。

6.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。