Coelenterazine e 腔腸素e

【溫馨提示】：見我司提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產品專題。

產品簡介：

腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發現的一種發光基團（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲熒光素酶（Obelia luciferase），和發光蛋白包括水母發光蛋白（Aequorin）的構成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產生高能量的中間產物，在此過程發射藍色光，光波長在450~480nm。而甲蟲（或螢火蟲）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg²⁺的存在才能同時發光，光波長在550-570nm。正由于生物發光信號和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯合用于多重轉錄報告基因研究，或用作Fluc系統內螢火蟲熒光素酶轉染的內參。

腔腸素應用甚是廣泛，包括：1）活細胞或組織的鈣離子檢測；2）細胞或組織的超氧化物和過氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學發光檢測；3）基因報告基因檢測；4）動物活體檢測；5）ELISA和生物發光共振能量轉移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）。

天然腔腸素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在最豐富的一種腔腸素，也是目前應用最普遍的一種標準底物。不僅是脫輔基水母發光蛋白（APO）的底物，也是海腎熒光素酶（Rluc）和分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）等熒光素酶的作用底物。前者用于檢測鈣離子濃度，后者用作熒光素酶的報告基因檢測系統。還可用于生物共振能量轉移BRET，細胞或組織內的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子水平（ROS）的化學發光檢測等。

腔腸素e（Coelenterazine e，CTZ-e），是一種天然腔腸素衍生物，帶有一個額外的乙基基團，從而形成一個額外的環形結構，最早由Shimomura進行描述。CTZ-e是一款優秀的海腎熒光素酶（Rluc）底物。CTZ-e產生的熒光接近于CTZ-Native的40%以上，雖然前者的初始熒光強度比后者高7倍多。CTZ-e/海腎熒光素酶的發射光譜有兩個峰值，分別為418nm和475nm。

CTZ-e也是一款良好的脫酰基水母發光蛋白（APO）底物，與CTZ-Native相比，CTZ-e形成的水母蛋白復合物具有更快的熒光上升時間，并且呈現兩個發射吸收峰（分別在405nm和465nm），吸收峰高度的比值取決于pCa 5-7范圍內的鈣離子濃度。這一雙吸收峰特征使得CTZ-e/APO通過吸收峰強度的比例來測定鈣離子成為可能。

產品描述：

1）CAS NO：114496-02-5

2）化學名：12-Benzyl-8-hydroxy-2-(4-hydroxybenzyl)-5,6-dihydrobenzo[f]imidazo[1,2-a]quinoxalin-3(11H)- one; Benz[f]imidazo[1,2-a]quinoxalin-3(6H)-one,5,11-dihydro-8-hydroxy-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-12 -(phenylmethyl);

3）同義名：e-Coelenterazine; e-CTZ; Coelenterazine-E; CTZ-E; CLZN-e; e-腔腸素；

4）分子式：C28H23N3O3

5）分子量：449.5 g/mol

6）純度：>95%

7）外觀：黃色至橙色固體

8）溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）化學結構圖：

保存條件: 

-20℃干燥避光保存，且保存于惰性氣體內。至少一年有效。

產品使用：

1. 實驗前將CTZ-e從冰箱取出回至室溫，之后低速離心使得管內固體（或粉末）落到管底。

2. 用酸化、脫氣體的無水乙醇溶解固體（或粉末），混勻，使其濃度為1mg/ml。

3. 最好于實驗前才對乙醇儲存液進行稀釋，再用于所有的魯米諾分析或實驗。根據具體的工作體系選擇合適的水溶性緩沖液對乙醇儲存液進行稀釋。（比如，100μM 用于熒光計分析）

4. 將未用完的CTZ-e溶液保存在-80℃，盡快用完。不可將水溶性工作液進行保存（會被氧化從而降解）。

附錄1 天然腔腸素及其衍生物的光譜特性：

附錄2天然腔腸素及其衍生物的應用差異：

注意事項：

1.      腔腸素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物最好以完全凍干粉的狀態保存在惰性氣體內，密封后置于-20℃或-70℃長期避光保存。管內即使有微量空氣，也會隨著時間慢慢氧化腔腸素使其活性喪失，這樣不同實驗之間的定量結果可能很不可信。

2.      腔腸素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物不建議以儲存液的形式保存，最好于實驗前配制新鮮的溶液。不建議將配好的腔腸素溶液儲存在-20℃或-70℃，因其具有一個高能量的二氧雜環丁酮環形結構，即使在低溫條件下都會自發降解。

3.      商業化腔腸素的種類繁多，有天然腔腸素，以及各種腔腸素衍生物（比如，腔腸素h，腔腸素400a，腔腸素e，腔腸素f，腔腸素hcp）。它們對鈣離子的親和力，光譜特性，以及應用傾向上會有差異，詳見附錄1—天然腔腸素及其衍生物的光譜特性，附錄2—天然腔腸素及其衍生物的應用差異選擇適當的產品。。

4.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。