Coelenterazine ip 腔腸素ip

【溫馨提示】：見我司提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產品專題。

產品簡介：

腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發現的一種發光基團（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲熒光素酶（Obelia luciferase），和發光蛋白包括水母發光蛋白（Aequorin）的構成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產生高能量的中間產物，在此過程發射藍色光，光波長在450~480nm。而甲蟲（或螢火蟲）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg²⁺的存在才能同時發光，光波長在550-570nm。正由于生物發光信號和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯合用于多重轉錄報告基因研究，或用作Fluc系統內螢火蟲熒光素酶轉染的內參。

腔腸素應用甚是廣泛，包括：1）活細胞或組織的鈣離子檢測；2）細胞或組織的超氧化物和過氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學發光檢測；3）基因報告基因檢測；4）動物活體檢測；5）ELISA和生物發光共振能量轉移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）。

天然腔腸素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在最豐富的一種腔腸素，也是目前應用最普遍的一種標準底物。不僅是脫輔基水母發光蛋白（APO）的底物，也是海腎熒光素酶（Rluc）和分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）等熒光素酶的作用底物。前者用于檢測鈣離子濃度，后者用作熒光素酶的報告基因檢測系統。還可用于生物共振能量轉移BRET，細胞或組織內的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子水平（ROS）的化學發光檢測等。

腔腸素ip（Coelenterazine ip，CTZ-ip）是一種天然腔腸素（CTZ-Native）的合成衍生物。腔腸素ip水母發光蛋白復合物的熒光強度比天然腔腸素幾乎高50倍，但對鈣離子的反應時間比天然腔腸素慢很多。

產品特性：

1）化學名：2-(4-hydroxybenzyl)-6-(4-hydroxyphenyl)-8-isobutylimidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one

2）同義名：CTZ-ip; ip-Coelenterazine; CLZN-ip; ip-腔腸素；

3）分子式：C23H23N3O3

4）分子量：389.45 g/mol

5）純度：≥98%

6）Ex/Em：λex\λem = 430/441 nm; Extinction coefficient: 7,000 (in MeOH)

7）外觀：黃色固體

8）溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）化學結構圖：

保存條件: 

-20℃干燥避光保存，且保存于惰性氣體內。至少一年有效。

產品使用：

一、 腔腸素ip的溶解事項

1）腔腸素ip不溶于水，接觸到空氣，水分或任何氧化劑都不穩定。千萬不要溶于DMSO，因會發生未知反應引起腔腸素ip的快速降解并生成未知的代謝產物。

2） 腔腸素ip溶于甲醇或乙醇，毒性最小的溶劑是無水乙醇，可溶解粉末配制成0.1-1mg/ml溶液，之后加入需要的緩沖液，盡量保持緩沖液pH小于7.0，因大多數腔腸素衍生物在堿性條件會快速降解，有時會立即產生沉淀。

二、 腔腸素ip的保存事項

最好在使用前，才用無水乙醇溶解腔腸素n粉末，然后用所選的緩沖液稀釋并混勻。此時配好的工作緩沖液需靜置20-30min使其穩定（因部分底物會發生自氧化）后才進行體外實驗。該工作液能穩定保存幾個小時（室溫3-4h），僅微弱的信號衰減可能發生。

不建議將腔腸素ip的乙醇溶液置于-20℃或-70℃保存，因天然腔腸素及任何衍生物含有一個高能量的二氧雜環丁酮環形結構，即使在低溫條件下都會自發降解。若一定要保存乙醇溶液，請置于氮氣或氬氣下＜-70℃避光保存，避免保存在玻璃容器內。

附錄1 天然腔腸素及其衍生物的光譜特性：

附錄2天然腔腸素及其衍生物的應用差異：

注意事項：

1.      腔腸素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物最好以完全凍干粉的狀態保存在惰性氣體內，密封后置于-20℃或-70℃長期避光保存。管內即使有微量空氣，也會隨著時間慢慢氧化腔腸素使其活性喪失，這樣不同實驗之間的定量結果可能很不可信。

2.      腔腸素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物不建議以儲存液的形式保存，最好于實驗前配制新鮮的溶液。不建議將配好的腔腸素溶液儲存在-20℃或-70℃，因其具有一個高能量的二氧雜環丁酮環形結構，即使在低溫條件下都會自發降解。

3.      商業化腔腸素的種類繁多，有天然腔腸素，以及各種腔腸素衍生物（比如，腔腸素h，腔腸素400a，腔腸素e，腔腸素f，腔腸素hcp）。它們對鈣離子的親和力，光譜特性，以及應用傾向上會有差異，詳見附錄1—天然腔腸素及其衍生物的光譜特性，附錄2—天然腔腸素及其衍生物的應用差異選擇適當的產品。

4.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。