Coelenterazine v 腔腸素v

【溫馨提示】：見我司提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產品專題。

產品簡介：

腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發現的一種發光基團（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲熒光素酶（Obelia luciferase），和發光蛋白包括水母發光蛋白（Aequorin）的構成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產生高能量的中間產物，在此過程發射藍色光，光波長在450~480nm。而甲蟲（或螢火蟲）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg²⁺的存在才能同時發光，光波長在550-570nm。正由于生物發光信號和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯合用于多重轉錄報告基因研究，或用作Fluc系統內螢火蟲熒光素酶轉染的內參。

腔腸素應用甚是廣泛，包括：1）活細胞或組織的鈣離子檢測；2）細胞或組織的超氧化物和過氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學發光檢測；3）基因報告基因檢測；4）動物活體檢測；5）ELISA和生物發光共振能量轉移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）。

天然腔腸素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在最豐富的一種腔腸素，也是目前應用最普遍的一種標準底物。不僅是脫輔基水母發光蛋白（APO）的底物，也是海腎熒光素酶（Rluc）和分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）等熒光素酶的作用底物。前者用于檢測鈣離子濃度，后者用作熒光素酶的報告基因檢測系統。還可用于生物共振能量轉移BRET，細胞或組織內的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子水平（ROS）的化學發光檢測等。

腔腸素v（Coelenterazine v，CTZ-v）是天然腔腸素（CTZ-Native）的一種合成衍生物，多帶一個芐基環。CTZ-v具有一獨特的特性，能夠將野生型海腎熒光素酶（wt RLuc），RLuc8和綠色海腎熒光素酶（Green RLuc）的發射光譜遷移到更長波長。

產品特性：

1）化學名：16-benzyl-5-hydroxy-13-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-11,14,17-triazatetracyclo [8.7.0.0^{2,7}.0^{11,15}]heptadeca-1(10),2(7),3,5,8,13,15-heptaen-12-one

2）同義名：CTZ-v; v-Coelenterazine; CLZN-v; v-腔腸素；

3）分子式：C28H21N3O3

4）分子量：447.48 g/mol

5）純度：≥93%

6）外觀：淺黃色粉末

7）化學結構圖：

保存條件: 

-20℃干燥避光保存，且保存于惰性氣體內。至少一年有效。

產品組成：

產品使用：

【注意】：最好在熒光計分析或實驗前馬上配制新鮮的腔腸素溶液。

1. 將低溫保存的凍干粉置于-20℃回至室溫，低溫保存的溶劑用微量恒溫儀（heat block）回至室溫，之后進行短暫低速離心，使得管內組分都落到底部。

2. 往500μg腔腸素v內加入1ml 專用的腔腸素溶劑，可用微量恒溫儀加熱到70℃促進粉末完全溶解，混勻后即得到0.5mg/ml 儲存液。【注意：不要用水浴鍋加熱，因溶液吸潮后會引起腔腸素v的快速降解】

3. 用PBS或TBS稀釋儲存液到所需的水溶性工作液（比如，若熒光計測定所需的濃度為50μM，加447.5μl（0.5mg/ml）到10ml PBS）。【注意：工作液現配現用，不可保存】

4. 腔腸素v儲存液置于-80℃避光保存，避免反復凍融，有條件的話保存在氮氣或氬氣內。盡快用完。當儲存液顏色變為深棕色/黑色，請勿繼續使用，這表明藥物完全降解（氧化）。

附錄1 天然腔腸素及其衍生物的光譜特性：

附錄2天然腔腸素及其衍生物的應用差異：

注意事項：

1.      腔腸素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物最好以完全凍干粉的狀態保存在惰性氣體內，密封后置于-20℃或-70℃長期避光保存。管內即使有微量空氣，也會隨著時間慢慢氧化腔腸素使其活性喪失，這樣不同實驗之間的定量結果可能很不可信。

2.      商業化腔腸素的種類繁多，有天然腔腸素，以及各種腔腸素衍生物（比如，腔腸素h，腔腸素400a，腔腸素e，腔腸素f，腔腸素hcp）。它們對鈣離子的親和力，光譜特性，以及應用傾向上會有差異，詳見附錄2—天然腔腸素及其衍生物的光譜特性，附錄3—天然腔腸素及其衍生物的應用差異選擇適當的產品。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。