Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級純（95%）

【溫馨提示】：見我司整理的鈣離子載體/探針（Calcium ionophores/indicators）產品專題。

【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內加載性。 

產品簡介：

Indo-1是一種常用的紫外光激發和比率測定型Ca²⁺熒光探針。一旦與Ca²⁺結合后，Indo-1的最大發射波長向短波長遷移，由原來的475nm（Ca²⁺-free）遷移到401nm（Ca²⁺-saturated），而最大激發波長無明顯變化，維持在346nm~330nm范圍內，適宜用氬離子激發器的UV激發光譜（351~364nm）進行熒光激活。因此，不同于Fura-2，Indo-1是發射波長率圖Ca²⁺熒光探針，特別適合流式細胞儀檢測，因其可在控制單一激發波長的條件下輕易調整發射濾片，也特別適合多色熒光檢測。使用發射波長下熒光強度的比率來測定細胞內Ca²⁺濃度，可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，探針的滲漏，細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。實際檢測，推薦使用最大發射波長分別用405nm和485nm。

Indo-1, AM是Indo-1的一種乙酰甲酯衍生物，具有細胞膜滲透性，只需簡單培養，即可輕易進入細胞。一旦進入細胞內，即被其內酯酶剪切生成不具膜滲透性的Indo-1，從而滯留在胞內以發揮相應生理功能。

基本特性：

1） CAS NO：112926-02-0

2） 化學名：1H-Indole-6-carboxylic acid, 2-[4-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-3-[2-[2-[bis[2- [(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]phenyl]-, (acetyloxy)methyl ester

3） 同義名：Indo-1, Acetoxymethyl Ester; Indo-1, AM ester; Indo-1 AM Calcium Sensor Dye;

4） 分子式：C₄₇H₅₁N₃O₂₂

5） 分子量：1009.91

6） 純度：≥95% (HPLC)

7） 外觀：黃色固體

8） 解離常數（Kd）：230nM

9） 消光系數：33000 cm^-1 M^-1

10） Ex/Em：346/475 nm（Ca²⁺-free），330/401 nm（Ca²⁺-saturated）

11） 溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

12）化學結構圖：

Indo-1, AM激發光譜圖

Description： Fluorescence emission spectra of indo-1 (NBS7644) in solutions containing 0–39.8 μM free Ca²⁺. 

保存條件: 

4℃保存（一年有效）

產品使用：

A， 試劑準備

1） 配制Pluronic F-127母液： 稱取100mg Pluronic F-127粉末（貨號：NBS2009）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理緩沖液

B，操作步驟

1）. Indo-1/AM 儲存液的配制 利用高質量無水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5mM的儲存液，該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存，最長可保存6個月，但是避免反復凍融，建議分裝保存。每次使用前需回溫至室溫。

2）. Indo-1/AM 工作液的配制 利用合適緩沖液（如HHBS）將Indo-1/AM稀釋成2-20μM的工作液，并添加0.04%PluronicF-127和有機陰離子轉運抑制劑probenecid（0.5-1mM）。 【注①】： 對于大多數細胞系，建議最終濃度為4-5 μM的Indo-1/AM。細胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據經驗確定。

【注②】： Indo-1/AM工作液需現配現用，避免反復凍存。

【注③】： PluronicF-127 可以防止Indo-1/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進入細胞。

3）. 取出預培養的細胞，除去培養基，使用緩沖液洗滌細胞3次。

【注①】：如果使用含血清的培養基，血清中的酯酶會降低Indo-1/AM進入細胞的效果。另外含有酚紅的培養基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養基殘留。

4）. 將 Indo-1/AM工作液加入細胞，加入量以覆蓋細胞為準。在37℃培養30-60min。

5）. 用緩沖液（如HHBS）洗滌細胞3次，以充分去除殘留的Indo-1/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細胞。

6）. 數字成像顯微鏡檢測細胞。

【注①】：某些細胞具有自體熒光會影響結果分析，需使用未加載探針細胞做對照，在結果分析時在同一波長下扣除自熒光。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3.      Indo-1, AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4.      Indo-1, AM第一次使用，建議儲存液現配現用，分裝成單次用量，嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存，以防止受潮。為了保證良好的實驗效果，盡量在短時間內使用。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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