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(NBS7639) Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

欄目:NoninBio
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(NBS7639) Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純
貨號:NBS7639-50ug;
NBS7639-250ug;
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NBS7639-1mg
品牌:NoninBio

 

Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

 

產品編號

產品名稱

包裝規格

價格

NBS7639-50ug

Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

50ug

469

NBS7639-250ug

Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

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NBS7639-20x50ug

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5650

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Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

1mg

3788

【溫馨提示】:見我司整理的鈣離子載體/探針(Calcium ionophores/indicators)產品專題。

【務必注意】:初次使用離子探針的用戶,強烈建議配合:Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級(NBS2009-1g一起使用,以提高探針的水溶性和胞內加載性。 


產品簡介:

Fluo-8,是目前最亮的可見光激發波長Ca2+熒光探針,其熒光強度比Fluo-4強兩倍,比Fluo-3強四倍。Fluo-8具中等程度的Ca2+親和力,幾乎接近Fluo-3,Fluo-4Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μMFluo-4: Kd= 0.389μM),使用上幾乎同Fluo-3Fluo-4。

Fluo-8不僅維持Fluo-3Fluo-4便捷的光譜檢測特性,與Ca2+結合后的最大激發波長為490nm,最大發射波長為514nm。而且具有改善的細胞載入和Ca2+響應能力。Fluo-8加載具較弱的溫度依賴性,在室溫或37℃孵育皆染色良好,不像Fluo-3,Fluo-4嚴格要求在37℃孵育,此特征使其更適用于HTS高通量篩選實驗。Fluo-8應用廣泛,與許多細胞系和靶向樣本兼容,不會受配體或靶標本身信號干擾。Fluo-8可通過激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀、熒光顯微鏡等來檢測胞內鈣離子水平的變化。

Fluo-8, AMFluo-8的一種乙酰甲酯衍生物,具有細胞膜滲透性,只需簡單培養,即可輕易進入細胞。一旦進入細胞內,即被其內酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fluo-8,從而滯留在胞內以發揮相應生理功能。本品以50μg小包裝的凍干粉形式供貨,用于細胞內Ca2+水平檢測時,常用濃度為1-5μM。

 

基本特性:

1)同義名:Fluo-8, Acetoxymethyl Ester;Fluo-2, AM; Fluo-2 Medium Affinity, Acetoxymethyl Ester;

2)化學名:Bis(acetoxymethyl) 2,2'-((4-(6-(acetoxymethoxy)-3-oxo-3H-xanthen-9-yl)-2-(2-(bis(2-acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)phenoxy)ethoxy)phenyl)azanediyl)diacetate

3)分子式:C50H50N2O23

4)分子量:1046.93

5)最大激發/發射波長:490/514 nmCa2+結合)

6)溶解性:溶于DMSO1~5mM

7)化學結構圖:

保存條件

-20℃干燥避光保存,有效期一年。

 

產品使用: 【注意】以下使用方法僅用作參考,可根據具體的實驗條件做出調整。

A、試劑準備

1. 配制Pluronic F-127母液:稱取100mg Pluronic F-127粉末(貨號:NBS2009中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存,不用冷藏。如有結晶析出,可以重新加熱后溶解,不影響使用。

2. HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3)或者其他生理緩沖液

B,操作步驟

1. 用無水DMSO溶解Fluo-8, AM配制成1-5mM的儲存液,或將已配好的Fluo-8, AM儲存液取出于室溫回溫。(如:若配制成4mM的母液,需向50μg Fluo-8,AM中加入11.9μl無水DMSO)。

2. HHBS或其他生理緩沖液將Fluo-8, AM+DMSO儲存液稀釋到1-10μM的工作液,提前加入適量的20% Pluronic F-127溶液,使其終濃度為0.02%

【注】:Fluo-8, AM應用在大部分細胞的推薦加載濃度為4-5μM,具體的使用濃度需根據實驗要求進行優化。為了避免過度加載造成細胞毒性,建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最低探針濃度。

【注】:Fluo-8, AM工作液需現配現用,避免反復凍存。

【注】:Pluronic F-127可以防止Fluo-8, AM在溶液中聚合并促使探針更好進入細胞。但Pluronic F-127可降低Fluo-8, AM的穩定性,因此只建議在配制工作液時加入,不建議加入儲存液長期保存。

3.【可選】如果細胞內含有機陰離子轉運體,丙磺舒(Probenecid1-2.5mM)或磺吡酮(Sulfinpyrazone,0.1-0.25mM)可能需要加入細胞培養基內,以降低去酯化探針的泄露水平。

【注】:丙磺舒或磺吡酮儲存液相當偏堿,因此加入培養基后需要重新調整pH。

4. 將準備好的Fluo-8, AM工作液加入細胞,加入量以覆蓋細胞為準。37℃或者室溫孵育20-60min。

【注】:關于孵育的時間,如果首次做實驗不能確定,建議先孵育30min,看熒光效果;如果細胞死亡較多,適當縮短時間;如果熒光強度太弱,適當延長時間。

【注】:降低探針加載溫度可能會降低探針的區室化現象。

5. 吸掉染色工作液,并用HHBS或其他生理緩沖液(如有必要,使用含轉運體抑制劑如2.5mM丙磺酸的緩沖液)替換,以去除多余探針。

6. 用適當的儀器如激光共聚焦、流式細胞儀、熒光酶標儀,以及波長Ex/Em=490/520 nm來進行檢測。

【注】:Fluo-8, AM進入胞內后,經酯酶降解形成Fluo-8,并不是以共價結合的形式滯留在細胞質內。因此不可對加載染料的活細胞進行固定處理,再進行Ca2+水平檢測。

 

注意事項:

1.      熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

2.      乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后請在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑微量,開封前請將其短暫離心,以保證粉末落入管底。

3.      Fluo-8, AM4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4.      Fluo-8, AM第一次使用,建議儲存液現配現用,分裝成單次用量,嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存,以防止受潮。為了保證良好的實驗效果,盡量在短時間內使用。

5.      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

 相關產品:

產品編號

產品名稱

CAS NO.  

包裝規格

NBS2009-1g

Pluronic?F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級

9003-11-6

1g

NBS2010-1ml

Pluronic? F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested

9003-11-6

1ml

NBS7636-50ug

Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

121714-22-5

50ug

NBS7637-1mg

Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%

121714-22-5

1mg

NBS7638-50ug

Fluo-4, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

273221-67-3

50ug

NBS7639-50ug

Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

N/A

50ug

NBS7640-50ug

Rhod-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

129787-64-0

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NBS7641-50ug

Rhod-4, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

N/A

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Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

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NBS7643-1mg

Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%

108964-32-5

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Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

112926-02-0

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NBS7645-1mg

Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%

112926-02-0

1mg


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