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(NBS7643) Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%)

欄目:NoninBio
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(NBS7643)Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%)
貨號:NBS7643-1mg
品牌:NoninBio

 

Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%)

 

產品編號

產品名稱

包裝規格

價格

NBS7643-1mg

Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%)

1mg

2122

【溫馨提示】:見我司整理的鈣離子載體/探針(Calcium ionophores/indicators)產品專題

【務必注意】:初次使用離子探針的用戶,強烈建議配合:Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級(NBS2009-1g一起使用,以提高探針的水溶性和胞內加載性。 

產品簡介:

Fura-2是一種常用的紫外光激發和比率測定型Ca2+熒光探針。一旦與Ca2+結合后,Fura-2的最大激發波長發生藍色遷移,由原來的363nm(Ca2+-free)遷移到335nm(Ca2+-saturated),而最大發射波長基本未變化,保持在510nm左右。通常情況,分別用最大激發波長340nm和380nm來激發Fura-2,且用340/380nm激發下的熒光比值來檢測細胞內Ca2+濃度。使用比值檢測,可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異,探針的滲漏,細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。Fura-2自1985年合成以來,廣泛用于各種細胞系統和生化用途,特別是數字顯微成像。單波長檢測,Fura-2與Ca2+結合后,推薦用最大激發和發射波長分別為340nm和510nm;雙波長檢測,則推薦用最大激發和發射波長分別為340nm和380nm;
    Fura-2, AM是Fura-2的一種乙酰甲酯衍生物,具有細胞膜滲透性,只需簡單培養,即可輕易進入細胞。一旦進入細胞內,即被其內酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fura-2,從而滯留在胞內以發揮相應生理功能。本品以凍干粉的形式提供,使用時只需經無水DMSO充分溶解,配置成1~5mM的儲存液,并稀釋到合適的工作濃度即可。進行細胞內Ca2+檢測,Fura-2, AM的常用濃度為0.5~5μM。

 

產品特性:

1)CAS NO:108964-32-5

2)同義名:Fura-2, Acetoxymethyl Ester

3)分子式:C44H47N3O24

4)分子量:1001.86

5)純度:≥95% (HPLC)

6)外觀:黃色粉末

7)最大激發/發射波長:363/512 nm(Ca2+-free),335/505 nm(Ca2+-saturated)

8)溶解性:溶于DMSO(1~5mM)

9)化學結構圖:


Fura-2, AM激發光譜圖:

Description:Fluorescence excitation spectra of fura-2 (NBS7643) in solutions containing 0–39.8 μM free Ca2+.


保存條件: 

-20℃干燥避光保存,有效期至少1年。

 

產品使用:

A, 試劑準備

1) 配制Pluronic F-127母液: 稱取100mg Pluronic F-127粉末(貨號:NBS2009)中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存,不用冷藏。如有結晶析出,可以重新加熱后溶解,不影響使用。

2) HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理緩沖液

B,操作步驟

1) 用無水DMSO溶解Fura-2, AM配制成1-5mM的儲存液,或將已配好的Fura-2, AM儲存液取出于室溫回溫。(如:若配制成4mM的母液,需向50μg Fura-2, AM中加入12.5μl 無水DMSO)。準備Fura-2, AM工作液之前,有時需要往Fura-2, AM儲存液中加入適量的20% Pluronic F-127溶液,以增強AM探針的水溶性。

注①】:Fura-2, AM染色工作液制備前,添加等體積20% Pluronic F-127溶液到Fura-2, AM+DMSO儲存液,從而使Pluronic F-127的最終工作濃度約為0.02%。

注②】:Pluronic F-127可以防止AM探針在溶液中聚合并促使探針更好進入細胞。但Pluronic F-127可降低AM探針的穩定性,因此只建議在配制工作液時加入,不建議加入儲存液長期保存。

2) 用HHBS或其他生理緩沖液將 Fura-2, AM+DMSO儲存液稀釋到0.1-5μM的工作液。

注①】:Fura-2, AM應用在大部分細胞的推薦加載濃度為4-5μM,具體的使用濃度需根據實驗要求進行優化。為了避免過度加載造成細胞毒性,建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最低探針濃度。

注②】:Fura-2, AM工作液需現配現用,避免反復凍存。

3) 【可選】如果細胞內含有機陰離子轉運體,丙磺舒(Probenecid,1-2.5mM)或磺吡酮(Sulfinpyrazone, 0.1-0.25mM)可能需要加入細胞培養基內,以降低去酯化探針的泄露水平。

注①】:丙磺舒或磺吡酮儲存液相當偏堿,因此加入培養基后需要重新調整pH。

4) 將準備好的Fura-2, AM染色工作液加入細胞,加入量以覆蓋細胞為準。37℃孵育20-60min。

注①】:若使用含血清的培養基,血清內酯酶會降解AM,從而降低Fura-2, AM加載效果。而含酚紅培養基會使本底值略偏高,建議加入染色工作液前,對細胞清洗2~3次。

注②】:關于孵育的時間,如果首次做實驗不能確定,建議先孵育30min,看熒光效果;如果細胞死亡較多,適當縮短時間;如果熒光強度太弱,適當延長時間。

注③】:降低探針加載溫度可能會降低探針的區室化現象。

5) 吸掉染色工作液,并用HHBS或其他生理緩沖液(如有必要,使用含轉運體抑制劑如2.5mM丙磺酸的緩沖液)清洗細胞1~2次,以去除殘留探針。

6) 37℃再孵育30min以保證細胞內AM的完全去酯化。

7) 用熒光顯微鏡、熒光分光光度計或其他熒光檢測設備,根據實驗要求選擇合適的波長進行檢測。

 

注意事項:

1.      熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

2.      乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后請在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑微量,開封前請將其短暫離心,以保證粉末落入管底。

3.      Fura-2, AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4.      Fura-2, AM第一次使用,建議儲存液現配現用,分裝成單次用量,嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存,以防止受潮。為了保證良好的實驗效果,盡量在短時間內使用。

5.      Fura-2, AM具有相對較強的抗光淬滅能力,細胞孵育后1h內觀察,都不會因熒光泄露和光漂白作用導致測定結果發生明顯變化。

6.      Fura-2不適合用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀檢測,因很難用它們完成激發光譜的快速轉換。

7.      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

相關產品:

產品編號

產品名稱

CAS NO.  

包裝規格

NBS2009-1g

Pluronic?F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級

9003-11-6

1g

NBS2010-1ml

Pluronic? F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested

9003-11-6

1ml

NBS7636-50ug

Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

121714-22-5

50ug

NBS7637-1mg

Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%

121714-22-5

1mg

NBS7638-50ug

Fluo-4, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

273221-67-3

50ug

NBS7639-50ug

Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

N/A

50ug

NBS7640-50ug

Rhod-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

129787-64-0

50ug

NBS7641-50ug

Rhod-4, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

N/A

50ug

NBS7642-50ug

Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

108964-32-5

50ug

NBS7643-1mg

Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%

108964-32-5

1mg

NBS7644-50ug

Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

112926-02-0

50ug

NBS7645-1mg

Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標準純(90%

112926-02-0

1mg

 

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