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(NBS7637) Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標(biāo)準(zhǔn)純(90%)

欄目:NoninBio
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(NBS7637)Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標(biāo)準(zhǔn)純(90%)
貨號:NBS7637-1mg
品牌:NoninBio

 

Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標(biāo)準(zhǔn)純(90%

 

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

價格

NBS7637-1mg

Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標(biāo)準(zhǔn)純(90%

1mg

3169

【溫馨提示】:見我司整理的鈣離子載體/探針(Calcium ionophores/indicators)產(chǎn)品專題

【務(wù)必注意】:初次使用離子探針的用戶,強烈建議配合:Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細(xì)胞培養(yǎng)級(NBS2009-1g一起使用,以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。 


產(chǎn)品簡介:

Fluo-3是一種常用的可見光激發(fā)波長Ca2+熒光探針,具有較高的Ca2+捕獲能力,通過熒光強度的變化直接反映Ca2+信號的動力學(xué)變化。當(dāng)Fluo-3以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的,但一旦與Ca2+結(jié)合即可產(chǎn)生很強的熒光,熒光信號增強60~80倍,此時的最大激發(fā)波長為506nm,最大發(fā)射波長為526nm。可通過激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀等來檢測胞內(nèi)鈣離子水平的變化。

Fluo-3, AMFluo-3的一種乙酰甲酯衍生物,具有細(xì)胞膜滲透性,只需簡單培養(yǎng),即可輕易進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),即被其內(nèi)酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fluo-3,從而滯留在胞內(nèi)以發(fā)揮相應(yīng)生理功能。本品以凍干粉的形式提供,使用時只需經(jīng)無水DMSO充分溶解,配置成2~5mM的儲存液,并依據(jù)具體實驗和相關(guān)文獻(xiàn)資料調(diào)整到需要的工作濃度即可。

 

產(chǎn)品特性:

1CAS NO121714-22-5

2)同義名:Fluo-3, Acetoxymethyl Ester

3)分子式:C51H50Cl2N2O23

4)分子量:1129.85

5)純度:≥95% (HPLC)

6)解離常數(shù)(Kd):390nM (Ca2+)

7)最大激發(fā)/發(fā)射波長:506/526 nm

8)溶解性:溶于DMSO2-5mM

9)化學(xué)結(jié)構(gòu)圖:

保存條件

-20℃干燥避光保存,有效期至少1年。

 

產(chǎn)品使用: (針對人T細(xì)胞Ca2+濃度檢測)

A  試劑準(zhǔn)備

1)配制Pluronic F-127母液

100mg Pluronic F-127粉末(貨號:NBS2009中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存,不用冷藏。如有結(jié)晶析出,可以重新加熱后溶解,不影響使用。

2Hanks Balanced Salt SolutionHBSS),w/o Ca2+Mg2+

3HEPES Buffer Saline

配方:10mM HEPES1mM Na2HPO4137mM NaCl5mM KCl1mM CaCl20.5mM MgCl25mM glucose0.1% BSApH 7.4

B  操作步驟

1)用無水DMSO溶解Fluo-3, AM配制成2-5mM的儲存液,或?qū)⒁雅浜玫?span>Fluo-3, AM儲存液取出于室溫回溫。(如:若配制成4mM的母液,需向50μg Fluo-3,AM中加入11μl無水DMSO)。

2 Fluo-3, AM+DMSO溶液中加入等體積的20% Pluronic F-127溶液,Pluronic F-127可以防止Fluo-3, AMHBSS中聚合并促使探針更好進(jìn)入細(xì)胞。【注】:Pluronic F-127可降低Fluo-3, AM的穩(wěn)定性,因此只建議在配制工作液時加入,不建議將其加入儲存液長期保存。

3)用HBSS稀釋Fluo-3, AM溶液,制備2-5μMFluo-3, AM工作液。【注】:推薦該探針加載濃度在4-5μM,具體的使用濃度需根據(jù)實驗要求進(jìn)行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細(xì)胞毒性,建議在取得有效結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用最低濃度探針。

4  Fluo-3, AM工作液加入細(xì)胞,加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。37℃孵育20min

5  加入5倍體積的含有1% FBSHBSS,繼續(xù)孵育40min

6  HEPES Buffer Saline洗滌細(xì)胞3次,然后用HEPES Buffer Saline使細(xì)胞重懸,制成1×105cells/ml的溶液。

7  37℃孵育10min,之后用流式細(xì)胞儀或者共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光鈣離子檢測。最大激發(fā)波長506nm,最大發(fā)射波長526nm

 

注意事項:

1.      熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

2.      乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量,開封前請將其短暫離心,以保證粉末落入管底。

3.      Fluo-3, AM4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4.      基于BAPTA結(jié)構(gòu)的鈣離子指示劑比如Fluo-3Fluo-4,能夠結(jié)合很多重金屬陽離子(比如:Mn2+Zn2+Pb2+)且實質(zhì)上親和力高于Ca2+。因此,由于這些重金屬離子存在對鈣測定的干擾可使用重金屬螯合劑-TPEN(貨號:NBS5877來控制。

5.      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

相關(guān)產(chǎn)品:

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

CAS NO.  

包裝規(guī)格

NBS2009-1g

Pluronic?F-127, Cell Culture Tested 細(xì)胞培養(yǎng)級

9003-11-6

1g

NBS2010-1ml

Pluronic? F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested

9003-11-6

1ml

NBS7636-50ug

Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

121714-22-5

50ug

NBS7637-1mg

Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標(biāo)準(zhǔn)純(90%

121714-22-5

1mg

NBS7638-50ug

Fluo-4, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

273221-67-3

50ug

NBS7639-50ug

Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

N/A

50ug

NBS7640-50ug

Rhod-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

129787-64-0

50ug

NBS7641-50ug

Rhod-4, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純

N/A

50ug

NBS7642-50ug

Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

108964-32-5

50ug

NBS7643-1mg

Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標(biāo)準(zhǔn)純(90%

108964-32-5

1mg

NBS7644-50ug

Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,超級純(95%

112926-02-0

50ug

NBS7645-1mg

Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,標(biāo)準(zhǔn)純(90%

112926-02-0

1mg


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