Quin-2 AM, Cell Permeant鈣離子熒光探針

 【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內加載性。 

產品簡介：

鈣離子測定在各種生理活動中發揮著重要作用，與鈣離子結合從而表現出光譜反應的熒光探針使得研究人員能夠觀察胞內游離鈣離子水平變化，通過熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光光度計和熒光酶標板來檢測。

Quin-2是第一代膜非滲透性的高親和鈣離子熒光探針（Kd=115nM, Ca²⁺），對鈣離子的選擇性高，不會受到鈉離子梯度、膜電位或胞內pH干擾。像Quin-2的高親和探針適合用于監測低水平鈣離子，比如：靜息細胞。細胞內加載高達2mM的Quin-2未發現嚴重的探針毒性效應，因此，Quin-2可能適用于緩沖胞內鈣瞬態。Quin-2與鈣離子結合后，紫外吸收和熒光光譜發生明顯遷移，熒光產率提高約20倍。Quin-2模擬鈣螯合劑EGTA的結構而設計，與鎂離子相比，能更緊密的結合鈣離子。Quin-2不具膜滲透性，可通過顯微注射、電轉或劃痕負載的方式進入胞內。與Fura-2、Indo-1、Fluo-3和Fluo-4相比，Quin-2具更低的吸收和光量子產率，因此，需要更高的加載濃度。最大波長（Ca²⁺-bound）：激發：339nm；發射：492nm。

Quin-2 AM（Quin-2 acetoxymethyl ester）是乙酰氧基甲酯形式的Quin-2，具細胞膜滲透性，能主動擴散進入胞內。一旦進入細胞，被胞內酯酶水解生成Quin-2，保留在胞內。

產品特性：

1）化學名：N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[2-[[8-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-6- methoxy-2-quinolinyl]methoxy]-4-methylphenyl]

-glycine(acetyloxy)methyl ester

2）同義名：Quin-2 Acetoxymethyl ester

3）CAS NO.: 83104-85-2

4）分子式：C38H43N3O18

5）分子量：829.8

6）外觀：固體

7）純度：≥90%

8）溶解性：DMSO

9）Ex/Em（Ca²⁺-bound）：339/492nm

10）化學結構圖：

保存條件: 

20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

產品使用：

1）用無水DMSO溶解Quin-2 AM配制成10mM或其它適宜濃度的儲存液，或將已配好的Quin-2 AM儲存液取出于室溫回溫。（如：若配制成10mM的母液，需向1mg Quin-2 AM中加入120.5μl無水DMSO充分溶解，混勻即可）。

2）用HHBS或其他生理緩沖液將Quin-2 AM+DMSO儲存液稀釋到含0.04% Pluronic F-127的10-20μM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20% Pluronic F-127溶液到Quin-2 AM+DMSO儲存液，使Pluronic F-127的濃度約為0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探針在溶液中聚合并促使探針更好進入細胞。但Pluronic F-127可降低AM探針的穩定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議加入儲存液長期保存。

【注②】：Quin-2 AM的適宜使用濃度需根據實驗要求進行優化。為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最低探針濃度。

【注③】：Quin-2 AM工作液需現配現用，避免反復凍存。

3）【可選】如果細胞內（比如CHO細胞）含有機陰離子轉運體，丙磺舒（Probenecid，1-2mM）可能需要加入上述染色工作液內（在孔內的最終濃度為0.5-1mM），以降低去酯化探針的泄露水平。

【注①】：我司提供多種丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（NBS2008-154mg），能降低有機溶劑的使用。

4） 加入等體積的染色工作液到細胞培養孔內，37℃孵育30-60min。

【注①】：某些細胞系探針的加載時間長于1h能提供更好的信號。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理緩沖液（如有必要，使用含轉運體抑制劑如1mM丙磺舒的緩沖液）清洗細胞1~2次，以去除殘留探針。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3.      Quin-2 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4.      Quin-2 AM第一次使用，建議儲存液現配現用，分裝成單次用量，嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存，以防止受潮。為了保證良好的實驗效果，盡量在短時間內使用。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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