Polybrene (10mg/ml) 聚凝胺 (10mg/ml)

貨號：NBS2554-1ml；

NBS2554-5ml

品牌：NoninBio

基本介紹：

Hexadimethrine Bromide，中文名海（地）美溴銨，CAS：28728-55-4，一種多聚陽離子聚合物，廣為人知的一種抗肝素劑（肝素拮抗劑），歸于其中和紅細胞表面凈負電荷的能力，常用來產生紅細胞的非特異性凝集。利用凝聚特性，也提供了一種準確、快速和簡單的方法用來體外測定肝素活性。自動化測序分析小劑量的海美溴銨可明顯改善多肽的降解現象，因其加入提高PVDF膜的親水性，減低測序過程中多肽的機械損失。海美溴銨能夠增強脂質體轉染效率，常常用在哺乳動物細胞的DNA轉染實驗。比如，可轉染低分子量質粒DNA進入細胞系（如CHO），這種細胞用其他方法如磷酸鈣共沉淀轉染相對比較難。也常用于逆轉錄病毒、慢病毒介導的基因轉染。作用原理可能在于能夠中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥和增強受體不依賴的病毒吸收，來增強病毒的感染效率。

本品為無菌溶液，濃度為10mg/ml，使用時一般按1:1000-1:2000稀釋，依細胞種類不同稀釋比例不同，具體查閱相關文獻或根據實驗室經驗來調整。

基本特性：

1）CAS：28728-55-4

2）同義名：Hexadimethrine Bromide; 1,5-Dimethyl-1,5-diazaundecamethylene polymethobromide;

3）純度：≥94% (titration)

4）濃度:10mg/ml in H₂O，無菌

5）化學結構式：

保存與運輸方法：

保存：-20℃凍存二年穩定。

運輸：冰袋運輸。

常見篩選濃度：

Polybrene（聚凝胺）是海（地）美溴銨（Hexadimethrine Bromide）液體制品的商標名，是一種非常有效的基因轉染增強劑。用于病毒介導細胞轉染常用濃度為8μg/ml，具體濃度依細胞類型會有差異，可參閱文獻或梯度實驗摸索。

Polybrene用于轉染增強劑，已經成為全球各大實驗室和各種基因轉染服務機構最通用的方法之一，相比于硫酸魚精蛋白（Protamine sulfate，CAS：98001-69-5）和其他陽離子的使用普遍率更高更廣泛。發表的文獻至少上萬篇。

參考使用濃度【文獻來源】：

1）用表達H-rasV12或小鼠Trop2基因的慢病毒感染新鮮制備的小鼠皮膚角質細胞（Keratinocytes），使用含4 μg/ml polybrene的培養基孵育48h。之后收集細胞。

文獻：Wang J, et al. Loss of Trop2 Promotes Carcinogenesis and Features of Epithelial to Mesenchymal Transition in Squamous Cell Carcinoma. Mol Cancer Res. 2011 Dec;9(12):1686-95.

2）用ATF3 shRNA慢病毒顆粒感染6孔板培養的HepG2細胞，加入含10 μg/ml polybrene的培養基孵育24h，polybrene用來增強慢病毒轉導效率。用嘌呤霉素（10μM）篩選陽性轉導細胞株。

文獻：Weng S, et al. Niclosamide induced cell apoptosis via upregulation of ATF3 and activation of PERK in Hepatocellular carcinoma cells. BMC Gastroenterol. 2016 Feb 25;16:25.

3）用TLR10 shRNA慢病毒顆粒感染THP-1細胞，細胞先于polybrene（8 μg/ml）混合后，將病毒加入細胞，病毒感染復數（MOI）為10。24h之后更換不含polybrene的新鮮培養基。用嘌呤霉素（1 μg/ml）篩選陽性克隆株。

文獻：Le HV, et al.Stable Toll-Like Receptor 10 Knockdown in THP-1 Cells Reduces TLR-Ligand-Induced Proinflammatory Cytokine Expression. Int J Mol Sci. 2016 Jun 1;17(6).

4）為提高腺病毒轉染效率和LacZ轉基因表達，使用6μg/ml Polybrene處理病毒載體后轉入BHK-21細胞（MOI為100），轉染率提高到95%，沒有用Polybrene處理的只有2.3%轉染率。

5）NPC細胞（50% confluence）用含5 μg/ml Polybrene的NBF培養基，之后用 ZNF804A shRNA慢病毒顆粒感染細胞；24h后，更換不含polybrene的NBF培養基。24-48h之后，加入嘌呤霉素（5 μg/ml）篩選陽性克隆株。

文獻：Chen J, et al. ZNF804A Transcriptional Networks in Differentiating Neurons Derived from Induced Pluripotent Stem Cells of Human Origin. PLoS One. 2015 Apr 23;10(4):e0124597.