殺稻瘟菌素S(滅瘟素)(10mg/ml)
Blasticidin S (10mg/ml)
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
殺稻瘟菌素S(Blasticidin S)是一種分離自灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的核苷肽類抗生素,通過(guò)特異性干擾核糖體肽鍵形成,強(qiáng)效抑制原核與真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成。本品主要用于篩選攜帶bsr或BSD耐藥基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞,具有起效迅速、作用強(qiáng)勁的特點(diǎn),通常一周內(nèi)即可完成陽(yáng)性克隆篩選,且極低濃度即可快速殺滅敏感細(xì)胞。
本品為溶于HEPES緩沖液(pH7.5)的即用型無(wú)菌溶液,濃度10mg/ml。細(xì)菌篩選常用濃度為25–100μg/ml,哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選常用濃度為1–50μg/ml。初次實(shí)驗(yàn)建議通過(guò)殺滅曲線確定最佳工作濃度,以實(shí)現(xiàn)篩選效率與成本的最優(yōu)化。
保存條件:
-20℃保存(一年有效)
產(chǎn)品特性:
1) 同義名:Blasticidin S Hydrochloride; 滅瘟素S鹽酸鹽; 稻瘟散;
2) CAS NO.:3513-03-9
3) 分子式:C17H26N8O5·HCl
4) 分子量:458.9
5) 純度:>95%(HPLC)
6) 化學(xué)結(jié)構(gòu)式:
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產(chǎn)品使用:
1. 大腸桿菌(E. coli)篩選(推薦濃度:25–100 μg/ml)
大腸桿菌對(duì)Blasticidin S天然敏感性較低,但攜帶bsr或BSD抗性基因的轉(zhuǎn)化子可在低鹽LB固體培養(yǎng)基(pH 8.0)中,采用100μg/ml Blasticidin S進(jìn)行高效篩選。注意:適當(dāng)提高pH值(至8.0)可顯著增強(qiáng)抗生素的篩選活性,提高陽(yáng)性克隆檢出率。
2. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選(常用濃度:1–50μg/ml)
哺乳動(dòng)物細(xì)胞系Blasticidin S的推薦工作濃度范圍為1–50μg/ml。由于不同細(xì)胞系對(duì)抗生素敏感性差異較大,初次實(shí)驗(yàn)強(qiáng)烈建議通過(guò)殺滅曲線(kill curve)確定最佳篩選濃度,以實(shí)現(xiàn)高效篩選并最大限度降低對(duì)細(xì)胞毒性。
一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞的建議工作濃度:
細(xì)胞系 | 培養(yǎng)基 | Blasticidin S篩選濃度 |
CHO | DMEM | 5-10μg/ml |
HEK293 | DMEM | 5-15μg/ml |
HeLa | DMEM | 2.5-10μg/ml |
Neuro2a | DMEM | 30μg/ml |
B16 | RMPI | 3-10μg/ml |
PC1.0 | RMPI | 10-30μg/ml |
THP-1 | RMPI | 10μg/ml |
篩選步驟:
1)轉(zhuǎn)染48h后,用含適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
【注】:抗生素在細(xì)胞活躍分裂期發(fā)揮最佳效應(yīng),細(xì)胞密度過(guò)高會(huì)降低篩選效率,傳代時(shí)細(xì)胞匯合度建議控制在25%以內(nèi)。
2)隨后每3–4天棄去舊培養(yǎng)基,加入含相同濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基,持續(xù)維持選擇壓力。
3)7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆形成情況。根據(jù)細(xì)胞類型及轉(zhuǎn)染/篩選效率,克隆形成時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)至14天或更久。
4)挑取5–10個(gè)抗性細(xì)胞克隆轉(zhuǎn)移至35 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中,繼續(xù)用選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天,隨后可進(jìn)行細(xì)胞活性或功能檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1. Blasticidin S為有毒化合物,操作時(shí)需注意防護(hù),切勿與身體或皮膚直接接觸。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途!
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常用篩選抗生素及其使用濃度:
貨號(hào) | 名稱 | 抗性基因 | 有效篩選濃度(μg/mL) |
大腸桿菌潮霉素抗性基因 (hyg,hph) | 哺乳動(dòng)物細(xì)胞:200-500 細(xì)菌/植物細(xì)胞:100-300 真菌:300-1000 | ||
蠟樣芽孢桿菌的bsr基因 土曲霉的BSD基因 | 哺乳動(dòng)物細(xì)胞:1-10 大腸桿菌:25-100 | ||
Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) | 酵母菌:10 絲狀真菌:25-150 | ||
Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) | 哺乳動(dòng)物細(xì)胞:50-1000 大腸桿菌:25-50 酵母菌:50-300 | ||
Tn601 (903)或Tn5來(lái)源的新霉素抗性基因(neo) | 哺乳動(dòng)物細(xì)胞:200-2000 植物細(xì)胞:10-100 酵母細(xì)胞:500-1000 網(wǎng)柄菌屬:10-100 | ||
鏈霉菌來(lái)源的嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(pac) | 哺乳動(dòng)物細(xì)胞:1-10 大腸桿菌:100-125 |