規(guī)格

1ml

運(yùn)輸溫度

冰袋運(yùn)輸

其他名稱(chēng)

Blasticidin   S Hydrochloride 滅瘟素S鹽酸鹽；稻瘟散；

保存溫度

-20℃保存

CAS號(hào)

3513-03-9

有效期

2年

應(yīng)用

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選抗生素

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Blasticidin S (10 mg/ml) 殺稻瘟菌素S（滅瘟素）（10   mg/ml）

產(chǎn)品標(biāo)簽

Blasticidin 殺稻瘟菌素；10mg/ml；bls 乙酰轉(zhuǎn)移酶基因；bsr或BSD   脫氨酶基因；遺傳霉素G418；Hygromycin     B 潮霉素B；CAS：3513-03-9

產(chǎn)品描述

Blasticidin S（殺稻瘟菌素），也稱(chēng)為滅瘟素S鹽酸鹽，稻瘟散，從灰色鏈霉菌Streptomyces   griseochromogenes分離到的一種核苷肽類(lèi)抗生素。主要通過(guò)干擾核糖體中肽鍵的形成來(lái)特異性抑制原核和真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成。殺稻瘟菌素S用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。殺稻瘟菌素S具有快速而強(qiáng)效的作用模式，一個(gè)星期內(nèi)完成陽(yáng)性克隆的篩選，且很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。

本品為溶于HEPES buffer，pH 7.5的無(wú)菌溶液，濃度為10mg/ml。用于細(xì)菌篩選的常用濃度為25-100μg/ml，用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選的常用濃度為1-50μg/ml，初次實(shí)驗(yàn)建議通過(guò)滅殺曲線(xiàn)來(lái)確定最佳使用濃度。

產(chǎn)品特性

1）同義名：Blasticidin   S   Hydrochloride滅瘟素S鹽酸鹽；稻瘟散；

2）CAS NO.：3513-03-9

3）分子式：C17H26N8O5·HCl

4）分子量：458.9

5）純度：>95%（HPLC）

6）化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃保存，2年有效，避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

使用濃度

1）大腸桿菌（E. coli）（常用濃度：25-100μg/ml）

E. Coli對(duì)Blasticidin   S敏感性很弱，但含Blasticidin S抗性的轉(zhuǎn)化子可在低鹽LB固體培養(yǎng)基（pH 8.0），100μg/ml Blasticidin   S的條件下進(jìn)行篩選。高pH可增強(qiáng)抗生素篩選活性。

2）哺乳動(dòng)物細(xì)胞（常用濃度：1-50μg/ml）

哺乳動(dòng)物細(xì)胞系BlasticidinS的常用工作濃度范圍1-50 μg/ml。初次實(shí)驗(yàn)建議通過(guò)滅殺曲線(xiàn)來(lái)確定最佳使用濃度。

一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞的建議工作濃度：

操作步驟

Blasticidin S常用濃度范圍1-50 μg/ml，以10 μg/ml為多，初次實(shí)驗(yàn)建議通過(guò)滅殺曲線(xiàn)來(lái)確定最佳使用濃度。攜帶bsr或BSD基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞后，用含有Blasticidin S的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆。

1）轉(zhuǎn)染48h后，用含適宜濃度Blasticidin   S的新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞傳代；【注】：細(xì)胞處于活躍分裂期時(shí)抗生素工作最好。細(xì)胞密度太高，抗生素效率降低。分盤(pán)時(shí)覆蓋率最好不超過(guò)25%。

2）每3-4天去除舊培養(yǎng)基，加入含相同濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基；

3）7天后評(píng)估細(xì)胞集落形成。根據(jù)宿主細(xì)胞種類(lèi)和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要再增加一周或更久。

4）轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆到35mm細(xì)胞培養(yǎng)盤(pán)，加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天。隨后進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1）Blasticidin S為有毒化合物，操作時(shí)需注意防護(hù)，切勿與身體或皮膚直接接觸。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。