產品簡介：

嘌呤霉素（Puromycin）是白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）產生的一種氨基糖苷類抗生素，可快速、高效地終止真核與原核生物的蛋白質合成。其結構與氨酰-tRNA3′末端相似，能進入核糖體A位并摻入延伸中的肽鏈，造成鏈的提前釋放與永久終止，從而殺死細胞：對革蘭氏陽性菌作用最強，對酸桿菌次之，對革蘭氏陰性菌及真核微生物（藻類、原生生物）亦有抑制；哺乳動物和昆蟲細胞在2μg/mL以上濃度、48h內即可被清除99%以上。此外，嘌呤霉素還表現出一定抗腫瘤活性，常被用作研究轉錄調控、細胞分化及基因表達順序的蛋白合成抑制劑。

抗性由pac基因編碼的嘌呤霉素N-乙酰轉移酶（PAC）賦予，該酶通過乙?；顾幬锸Щ?。由于pac基因已廣泛克隆至慢病毒、逆轉錄病毒及多種真核/原核表達載體，嘌呤霉素成為篩選和維持穩定轉染/感染細胞株（尤其是慢病毒系統）以及CRISPR/Cas9編輯后陽性克隆的首選藥物。個別情況下亦可用于攜帶pac的大腸桿菌篩選。

本品為10mg/mL、經0.22μm過濾除菌的嘌呤霉素鹽酸鹽水溶液，可直接用培養基稀釋。真核細胞常規篩選濃度1–10μg/mL，具體用量請依據細胞類型預實驗確定。

產品特性

1） 化學名：3'-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3'-deoxy-N,N-dimethyladenosine dihydrochloride

2） 同義名：Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;

3） CAS NO.：58-58-2

4） 分子式：C₂₂H₂₉N₇O₅·2HCl

5） 分子量：544.43g/mol

6） 外觀：無菌溶液

7） 純度：＞98% (HPLC)

保存條件: 

-20℃保存（1年有效）

產品使用：

1、 試劑準備

第一次收到本品，可根據單次用量，將嘌呤霉素（10mg/ml）無菌分裝，置于-20℃保存，盡量減少反復凍融次數。

2、建議工作濃度

哺乳動物細胞：1-10μg/ml，最佳工作濃度使用宿主細胞殺滅實驗（殺滅曲線）來確定；

大腸桿菌：LB瓊脂培養基篩選敏感轉化菌株，使用濃度為100-125μg/ml。

【注意】：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌陽性轉化子不僅需精確的pH值調節，而且受宿主細胞本身狀態影響。

3、殺滅曲線的建立

嘌呤霉素合適的篩選濃度與細胞類型、生長狀態、細胞密度、代謝情況，以及細胞所處周期等因素有關。為了篩選到穩定表達的細胞株，確定殺死未轉染或感染細胞所需的最低濃度嘌呤霉素至關重要。建議初次實驗一定要建立殺滅曲線（kill curve），篩選到適合自身實驗體系的最優篩選濃度。

1）于24孔板加入500μl/孔制備好的細胞懸液，鋪足夠的孔以保證后續的梯度實驗。37℃細胞孵育過夜。理想情況開始抗生素篩選時，細胞達到較高的密度（~60-80%），常用的細胞密度如下：

貼壁細胞：0.8 - 3.0 x 10⁵ cells/ml

懸浮細胞：2.5 - 5.0 x 10⁵ cells/ml

2）準備篩選培養基：含梯度濃度嘌呤霉素的新鮮培養基（比如，設置0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10μg/ml，這11個篩選濃度，每個濃度2個復孔）；

3）將孵育過夜的細胞清洗后，更換新鮮制備的梯度篩選培養基；之后置于37℃，5%CO2培養箱內孵育；

4）根據細胞的生長狀態，約2-3天更換新鮮的篩選培養基；

5）每日監測細胞，觀察存活細胞率，從而確定抗生素篩選開始4-6天內有效殺死非轉染或者所有非感染細胞的抗生素最低濃度，也就是將用到的最優篩選濃度。

【注意】：如果發現細胞開始變圓但沒有從平板表面脫落可能是以下情況，

a）變圓但是未脫落是細胞開始死亡的一個信號，這些需要更長的篩選時間；

b）若在建議濃度1-10μg/ml范圍內還不能完全處死細胞，此時需要檢測藥物是否有效，避免藥物的反復凍融（<5）。

注意事項：

1. 嘌呤霉素為有毒化合物，操作時需注意防護，切勿與身體或皮膚直接接觸。

2. 了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常用篩選抗生素及其使用濃度: