<NBS0201> 單組份TMB顯色液（Elisa HRP 顯色用）
<NBS0201> 單組份TMB顯色液（Elisa HRP 顯色用）
貨號：NBS0201-100ml
品牌：NoninBio
產品簡介：
酶聯免疫分析技術（ELISA）廣泛用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析，辣根過氧化物酶（HRP）及其偶聯物是ELISA技術常用的一種酶，能催化底物如3,3'5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）發生顯色反應，從而進行定量或定性分析。由于TMB比其他顯色底物具更高的靈敏度且無致癌性被廣泛使用，TMB主要用于ELISA，免疫斑點雜交或免疫組化等實驗，也有報道將其用于氯的檢測分析。
通常TMB顯色試劑由多個組分構成，必須在使用前進行配制，并且容易產生沉淀，使用相對不便且容易導致檢測結果不穩定。本品采用全新的TMB顯色技術，將所有相關試劑全部配在一個溶液，即僅由單一溶液組成，不僅簡化了操作步驟，而且使檢測結果更加穩定可靠。
本品專門為ELISA實驗而設計。檢測原理在于HRP或其他適當過氧化物酶能催化生成可溶的藍色產物，此時通常可在370nm測定吸光度。當顯色反應被酸性溶液（如0.5-2M H2SO4，0.5M HCL，1M H3PO4）終止后，產物由藍色轉為黃色，此時可在450nm測定吸光度。由于本品顯色敏感度高，線性濃度范圍較寬，極其適合用于定量ELISA分析。
本品用于ELISA檢測，每個樣品通常使用0.1ml顯色液，即100ml本品約檢測1000個樣品。
保存條件：
4℃避光保存，兩年有效。
注意事項：
1. 本品含TMB和H2O2，對人體有刺激性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 如發現本品出現渾濁或顏色變為藍色，請停止使用。
產品使用：
1. 使用之前，取出適量單組份TMB顯色液，使其回到室溫再開始使用。
2. 參考ELISA檢測試劑盒的實驗步驟，當與HRP標記抗體孵育一段時間后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min。
3. 洗滌完畢后，去除洗滌液，加入100μl單組份TMB顯色液。
4. 室溫避光孵育5-30min或更長時間（可長達24h），直至顯色到預期深淺。建議根據實驗需求選擇最佳試劑用量、顯色時間和反應溫度。
5. 直接在370nm測定吸光度。或者加入100μl 0.5-2M H2SO4終止反應，隨后在450nm測定吸光度。
常見問題：
1. 背景顯色太深
1) 如果背景（沒有樣品的對照）顯色太深，一方面需考慮使用適當的封閉液進行封閉，如商品化封閉液或者和一抗相同來源的血清（10%）進行封閉。另一方面，使用經過適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。
2) 可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗濃度。另外，選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間也會有所幫助。
2. 沒有顯色或顯色太弱
1) 適當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內，檢測二抗是否被正常顯色。
2) 可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如生物素檢測體系。
3) 可以適當延長顯色時間。
4) 如果上述改進不能獲得預期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。
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