<NBS4942> 分散酶（中性蛋白酶）Dispase II (neutral protease, grade II)
<NBS4942> 分散酶（中性蛋白酶）Dispase II (neutral protease, grade II)
貨號：NBS4942-100mg ;
NBS4942-1g
品牌：NoninBio
Dispase II (neutral protease, grade II)
分散酶（中性蛋白酶）
產品編號 | 產品名稱 | 包裝規格 |
NBS4942-100mg | 分散酶（中性蛋白酶）Dispase II | 100mg |
NBS4942-1g | 分散酶（中性蛋白酶）Dispase II | 1g |
產品簡介：
中性蛋白酶（Neutral protease），商業名稱Dispase II，也稱分散酶II，普遍用于不同組織和器官中的細胞分離。Dispase II是一種非特異性金屬蛋白酶，能快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質釋放單細胞培養物（原代細胞培養物）或收集已培養的細胞將其轉移到新的培養基質上（傳代培養）。另外，還能預防懸浮細胞培養過程中發生的成團現象。Dispase II極其穩定，不會受溫度、pH和血清內容物的干擾；通過螯合劑或稀釋很容易失活；酶活溫和，對細胞損傷小，可良好維持細胞膜完整性。
本品來源于多粘芽孢桿菌（Bacillus polymyxa），無支原體或其他動物病毒污染。以非無菌的凍干粉形式提供，比活力≥0.8 U/mg蛋白，使用前需進行除菌。常用工作濃度范圍為0.6-2.4 U/ml。
產品特性:
1） EC NO：3.4.24.4
2） 同義名：Neutral protease中性蛋白酶
3） 比活力：≥0.8 U/mg protein (37℃, casein as substrate, pH 7.5)
4） 酶活力單位定義：在37℃，pH 7.5的反應條件下，1min內釋放福林酚陽性反應氨基酸和多肽量相當于1 μmol (181 μg)酪氨酸所需的酶量即為一個活力單位。
5） 最佳pH：6.0 - 8.5
6） 激活劑：最佳Ca2+為2mM，該酶已含足量Ca2+確保最佳酶活力。
7） 抑制劑： EDTA, EGTA, Hg2+,以及其他重金屬。該酶活性不受血清干擾。
保存條件:
2-8℃干燥保存，至少1年有效。
產品使用：
一、儲存液和工作液制備
1）儲存液制備：用Hepe緩沖鹽溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II凍干粉，配制成10mg/ml的儲存液，用0.22μM濾膜過濾除菌。本儲存液置于2-8℃，2周穩定；根據單次用量分裝凍存，高達2個月穩定，避免反復凍融。
2）工作液制備：使用時用合適的細胞培養液將儲存液稀釋到工作液濃度即可，常用工作濃度為0.6-2.4 U/ml。不推薦使用>2.4 U/ml的工作濃度。具體使用濃度請根據自身實驗體系或參考文獻來調整。
二、組織分離
1）用無菌手術刀或剪刀將組織切成3-4mm小片，之后用無菌PBS緩沖液清洗組織片幾次；
2）用Dispase II工作液（0.6-2.4 U/ml）浸沒并37℃孵育進行組織解離；
3）置于水平搖床上，低速轉動，37℃孵育直至組織完全解離；【注意】：第一次使用Dispase II，通過細胞計數來確定總反應時間。對于堅硬致密組織需要1h的孵育時間，不過孵育時間幾小時也不會有副作用。
4）若有需要，將消化產物用無菌不銹鋼網過篩，從而分離解散細胞和殘留組織，或當更大片段組織靜置到管底，輕輕倒出上層細胞。若需要進一步解離，則加入新鮮的Dispase II工作液到殘留組織。
5）低速離心收集細胞，吸掉酶工作液；
6）用適當的細胞培養液重懸細胞，置于正常預優化條件下培養。
三、細胞亞培養
1）用37℃預熱的Dispase II工作液完全覆蓋細胞，置于37℃孵育5min；
2）吸掉溶液，于37℃再孵育10min；
3）顯微鏡觀察以確定消化情況，若有需要，可再孵育15min；
4）用細胞培養液重懸細胞，低速離心并用培養基清洗細胞幾次；
5）用新鮮細胞培養液重懸細胞；
6）按照常規方法進行分盤傳代。
注意事項：
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
相關產品：
產品編號 | 產品名稱 | 包裝規格 |
100mg | ||
100mg | ||
100mg | ||
100mg | ||
100mg | ||
100mg | ||
100mg | ||
25mg | ||
100mg | ||
200mg |
公司名稱：上海諾寧生物科技有限公司
聯系地址：上海市閔行區虹梅南路2588號綠亮科創園A531
聯系電話：021-61241614 18616364863
聯系 Q Q：306458042（經銷商）392324729（科研終端）
E-mail：noninbio@163.com
