pH熒光探針（紅600- Dextran, 檢測胞吞作用）

產品簡介：

pH熒光探針是一種pH敏感型熒光染料，其熒光強度隨環境pH值變化而顯著改變。染料在細胞外不發熒光，在酸性室（如吞噬體、溶酶體和內體）中熒光信號顯著增強，而在中性或堿性環境中，熒光較弱。pH熒光探針使得能夠特異性檢測細胞酸性室，從而在成像或流式分析中降低信號變異性并提高準確性。

產品特性：

1)     分子量：~10000

2)     外觀：黑色固體

3)     溶解度：在水中溶解

4)     Ex(nm)：576

5)     Em(nm)：597

pH熒光探針（紅600）的pH依賴性發射光譜

保存條件: 

-20℃避光保存，2年有效。

產品使用：（僅供參考）

1. 細胞的準備

將貼壁細胞按照40000~80000個/孔接種于96孔板中，每孔100μL。對于384孔板，按照10000~20000個/孔接種，每孔25μL。過夜培養。

【注意】應對每個細胞系進行單獨評估，以確定佳細胞密度。

2. 制備pH Red-Dextran工作液

a)     在1 mL無菌水或含20 mM Hepes緩沖液的Hanks溶液（HHBS）緩沖液中制備1 mg/mL的pH Red-Dextra儲備溶液。

【注意】儲備液應立即使用，未使用的部分需要分裝并于-80~-20℃保存，避免反復凍融，避免光照。

b)     用HHBS緩沖液或其他合適緩沖液稀釋儲備液，制備20-100μg/mL pH Red-Dextra 工作液。

【注意】如果您的待檢藥物受血清或白蛋白干擾，請使用HHBS緩沖液或無血清培養基進行工作液的配制。

3. 細胞內吞作用的檢測

a)     吸棄步驟1中過夜培養后的原培養基，按照100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的量，加入pH Red-Dextra工作液。

【注意】pH Red-Dextra可以從早期內體轉移到晚期內體，并隨后與溶酶體融合。為了便于觀察內體中pH Red-Dextra，我們建議增加標記濃度、縮短加載時間，并立即進行成像。

b)     置于細胞培養箱中孵育5~20分鐘。

c)      清洗并用HHBS緩沖液或生長培養基清洗并更換工作液。

d)     通過監測Ex/Em=576/597nm處的熒光來進行胞吞作用測定。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      熒光信號在轉運至溶酶體后至少能保持穩定狀態一小時之久。

3.      因為溶酶體的pH值低于內體，所以溶酶體的染色通常會比內體更顯著。通過熒光強度的變化可以推斷出內吞 作用或溶酶體功能的變化情況。

4.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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