DiIC18(5)-DS 細(xì)胞膜橙紅色熒光探針

【溫馨提示】：見我司整理的細(xì)胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產(chǎn)品專題 。

產(chǎn)品簡介：

DiIC18(5)-DS是DiD（DiIC18(5), Cat#：NBS5131）的磺酸化衍生物，具有更好的水溶性，且在固定和透化處理后能維持良好的染色狀態(tài)。

DiIC18(5)-DS是紅色熒光和親脂性碳菁類染料-DiD（DiIC18(5)）的類似物，英文全名：1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'- Tetramethylindodicarbocyanine-5,5'-Disulfonic Acid，包含磺酸基團(tuán)以改進(jìn)探針的水溶性。在水中呈弱熒光，插入膜內(nèi)則呈強(qiáng)熒光且相當(dāng)穩(wěn)定。在脂質(zhì)環(huán)境內(nèi)具極其高的摩爾吸光系數(shù)和短的激發(fā)態(tài)壽命（~1ns）。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，于最佳濃度條件下可將整個細(xì)胞均勻染色。

保存條件: 

-20oC干燥避光保存，有效期至少一年。

產(chǎn)品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)條件做出調(diào)整。

1. 染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取5mgDiIC18(3)-DS（Mw：993.53g/mol）溶于1ml無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液。【注意】未使用的儲存液根據(jù)單次用量分裝儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調(diào)整到1～5 μM的工作濃度。【注意】工作液最終濃度需要根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區(qū)間進(jìn)行最優(yōu)濃度的摸索。

2.懸浮細(xì)胞染色

1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

5）再重復(fù)3），4）步驟兩次。

3.貼壁細(xì)胞染色

1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內(nèi)。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

4）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見下表：

2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：

a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；

b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；

c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005；

5.流式細(xì)胞儀檢測

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞分別用流式細(xì)胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。

注意事項(xiàng)：

1.      經(jīng)碳菁類染料（比如DiR）染色后的細(xì)胞能用多聚甲醛（PFA）固定，但不能用甲醇或其他溶劑的固定劑。染色能承受0.1% Triton X-100或0.1%毛地黃皂苷的透化處理，但會明顯增強(qiáng)胞內(nèi)染色。

2.      經(jīng)碳菁類染料（比如DiR）染色后的細(xì)胞不建議使用封片劑，因封片劑內(nèi)的甘油或有機(jī)溶劑會溶解染料，引起增加的胞內(nèi)染色和隨時間增加的高背景。建議直接在PBS或其他生理緩沖液內(nèi)成像。使用PBS直接蓋上蓋玻片，然后四周用指甲油密封。

3.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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