DiIC12(3) perchlorate 細(xì)胞膜熒光探針

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的細(xì)胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產(chǎn)品專(zhuān)題 。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

橙紅色熒光、親脂性碳菁染料-DiIC12(3)，是DiI (DiIC18(3))（Cat#：NBS5129）的短鏈類(lèi)似物，能比DiI更輕易插入細(xì)胞膜。在水中呈弱熒光，一旦插入膜后發(fā)強(qiáng)熒光且光相對(duì)穩(wěn)定。脂質(zhì)環(huán)境中具極其高消光系數(shù)和短激發(fā)態(tài)壽命（~1ns）。一旦加入細(xì)胞中，染料橫向擴(kuò)散進(jìn)入質(zhì)膜。DiIC₁₂(3)是一種親脂性神經(jīng)元示蹤劑，通常用于標(biāo)記神經(jīng)元項(xiàng)目以及其它細(xì)胞（特別是內(nèi)皮細(xì)胞）的脂質(zhì)雙分子層。

基本特性：

1） 同義名：DiI perchlorate; DiIC18(3);1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate;

2） CAS NO：41085-99-8

3） 分子式：C59H97ClN2O4

4） 分子量：933.87 g/mol

5） 純度：≥95%（TLC）
6） 溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
7） 外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末
8） Ex/Em：549/565 nm（in phosphate buffer/SDS pH 7.0）
9） 推薦濾光器：Omega- XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

10）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

4oC干燥避光保存，有效期一年。

產(chǎn)品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)條件做出調(diào)整。

1.染色液制備

1）儲(chǔ)存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲(chǔ)存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87 g/mol）溶于1.07ml無(wú)水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲(chǔ)存液。【注意】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，調(diào)整到1～5 μM的工作濃度。【注意】工作液最終濃度需要根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度開(kāi)始，以10倍范圍為區(qū)間進(jìn)行最優(yōu)濃度的摸索。

2.懸浮細(xì)胞染色

1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

5）再重復(fù)3），4）步驟兩次。

3.貼壁細(xì)胞染色

1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內(nèi)。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

4）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測(cè)

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見(jiàn)下表：

2）多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定：

a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；

b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；

c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005；

5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞分別用流式細(xì)胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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