DiIC12(3) perchlorate 細胞膜熒光探針

【溫馨提示】：見我司整理的細胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產品專題 。

產品簡介：

橙紅色熒光、親脂性碳菁染料-DiIC12(3)，是DiI (DiIC18(3))（Cat#：NBS5129）的短鏈類似物，能比DiI更輕易插入細胞膜。在水中呈弱熒光，一旦插入膜后發強熒光且光相對穩定。脂質環境中具極其高消光系數和短激發態壽命（~1ns）。一旦加入細胞中，染料橫向擴散進入質膜。DiIC₁₂(3)是一種親脂性神經元示蹤劑，通常用于標記神經元項目以及其它細胞（特別是內皮細胞）的脂質雙分子層。

基本特性：

1） 同義名：DiI perchlorate; DiIC18(3);1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate;

2） CAS NO：41085-99-8

3） 分子式：C59H97ClN2O4

4） 分子量：933.87 g/mol

5） 純度：≥95%（TLC）
6） 溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
7） 外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末
8） Ex/Em：549/565 nm（in phosphate buffer/SDS pH 7.0）
9） 推薦濾光器：Omega- XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

10）化學結構圖：

保存條件: 

4oC干燥避光保存，有效期一年。

產品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據具體的實驗條件做出調整。

1.染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87 g/mol）溶于1.07ml無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液。【注意】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5 μM的工作濃度。【注意】工作液最終濃度需要根據不同細胞系和實驗體系來優化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區間進行最優濃度的摸索。

2.懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長培養液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3.貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。

2）從培養基中移走蓋玻片，濾掉過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的小室內。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化以保證得到均一化的標記結果。

5）吸掉染色工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養基。

4.顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見下表：

2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；

b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；

c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005；

5.流式細胞儀檢測

經DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分別用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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