SYTOX Orange Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO)

死細胞橙色熒光核酸染料

產品簡介：

SYTOX Orange核酸染料（SYTOX OrangeNucleic Acid Stain），是一種高親和力的核酸染料，輕易滲透進入受損的細胞質膜，但不能穿透活細胞膜。探針只需簡單孵育，使用氦氖激光器（He-Ne Laser）的543nm激光或其它520-550nm光源進行激發，死細胞的核酸則呈明亮的橙色熒光。結合以上特征，以及熒光增強＞500倍（與核酸結合）的優點，使其成為一種簡單且定量的一步法死細胞指示劑，當用熒光顯微鏡、熒光光度計、熒光酶標板和流式細胞儀檢測。與死細胞染料-碘化丙啶相比，SYTOX Orange的發射波長更短，且光譜更匹配與羅丹明濾片設置。另外，SYTOX Orange有更高的摩爾吸光系數和更大的熒光增強（與DNA結合后），這些都表明SYTOX Orange是一款更高靈敏度的死細胞染料或核復染劑。

SYTOX Orange這一死細胞核酸染料可與藍色和綠色熒光的表面標記聯合使用，用于多指標分析。也能將SYTOX Orange與任一具細胞滲透性的核酸染料比如：Hoechst 33258，用于雙色標記死細胞和活細胞。

本品以DMSO儲存液形式提供，濃度為5mM。只需用合適的生理緩沖液稀釋到工作濃度進行簡單孵育即可。適用于哺乳動物細胞、細菌和酵母菌。

產品特性：

1）同義名：SYTOX Orange dye；SYTOX Orange死細胞染料;SYTOX Orange細胞核染料;

2）外觀：紅色溶液

3）熒光特征：Abs/Em=547/570nm（與DNA結合）

4）滲透性：不能進入活細胞

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

產品使用：(以下步驟僅用作示例以指導科研人員開展自身細菌樣本的染色)

基于實驗室經驗和發表方法，建議使用廣譜的染色濃度來開展使用，并且根據自身的細胞類型和實驗體系來優化摸索出最佳的工作濃度（見表1）。

使用塑料管來稀釋SYTOX染料，由于稀釋后的染料會粘附到玻璃上。總的來說，用不含磷酸鹽的緩沖液來染色能得到最好的結果。塑料或玻璃器皿上殘留的去污劑也有可能影響許多細胞或有機體的真實染色，導致在含或不含細胞的溶液中都能看到發明亮熒光的材料。確保用溫和去污劑來清洗玻璃器皿，用熱自來水完全沖洗干凈，最后用去離子水清洗數次。

①離心收集細胞，用生理鹽溶液或水重懸細胞。貼壁細胞（比如：哺乳動物細胞）可能在蓋玻個染料濃度，片上原位染色。使用表1內建議的工作濃度進行染色。初次實驗，建議在建議濃度范圍內做多,以確定能得到最佳染色的工作濃度。需要注意：生長培養基、細胞密度、是否存在其它細胞、和其它因素都可能影響染色。

②染色的真核細胞通常顯示出彌散的細胞漿染色和細胞核染色，特別是經常看到明亮的核內小體染色。由于此染料具細胞膜滲透性，且中性pH下帶凈正電荷，也有可能染線粒體。活酵母菌內主要是線粒體染色。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

應用示例：

文獻1：

實驗目的：SYTOX Orange是常用的核酸染料用來檢測胞外陷阱（extracellular traps，ETs)。

染色對象：THP-1細胞，染色劑量：SYTOX Orange（0.6 μM）

Fig 1. eCIRP induces extracellular trap formation in THP-1 cells. (A)THP-1 cells were treated with PBS or rmCIRP (1 μg/ml) in the presence of SYTOX Orange (0.6 μM) and subjected to the time-lapse live-cell imaging immediately after the treatment with rmCIRP. The upper panel shows the cells treated with PBS without rmCIRP, and the lower panel shows the cells treated with rmCIRP at different time points. Scale bar, 100 μm. (B) The dose-dependent effect of rmCIRP was quantified by counting the cells positive to SYTOX Orange. (C) Data shows the percentage of THP-1 cells positive to SYTOX Orange at 16 h after rmCIRP treatment (n = 4–5 microscopic fields for each condition). One-way ANOVA with Turkey method: *p <0.05. (D) THP-1 cells were pre-treated with IgG isotype Abs (10 μg/ml) or anti-TLR4 Abs (10 μg/ml) for 30 min. These cells were then treated with PBS or rmCIRP (0.5 μg/ml) in the presence of SYTOX Orange (0.6 μM) and subjected to the time-lapse live-cell imaging immediately after the treatment with rmCIRP. The time-lapse live-cell imaging data were acquired up to 18 h. The representative microscopic images taken at 18 h of rmCIRP treatment are captured and shown. Scale bar, 100 μm. (E) The percentages of SYTOX Orange positive cells in various experimental groups with time are shown.

文獻2：

實驗目的：使用SYTOX Orange實時監測dsDNA。

實驗方法：Double-stranded DNA was visualized in real time by staining with150 nM SYTOX Orange excited by a 568-nm laser (Coherent, Sapphire 568–200 CW) at 150 μW/cm2. The SSB–GFP was excited at 700 μW/cm2 with a 488 nm laser (Coherent, Sapphire 488–200 CW). Imaging was done with an EMCCD camera (Photometics, Evolve 512 Delta). The analysis was done with ImageJ using in-house built plugins. The rate of replication of a single molecule was obtained from its trajectory and calculated for each segment that has constant slope.

Fig 2. Single-molecule rolling-circle replication assays. (B) Kymograph of an individual DNA molecule undergoing leading- and lagging-strand replication. The gray indicates the fluorescence intensity of dsDNA stained by SYTOX orange.

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