DAPI 細(xì)胞核探針

溫馨提示：見(jiàn)我司整理的細(xì)胞核（Cell Nuclear）熒光探針產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

DAPI，英文全稱4’,6-Diamidino-2’-phenylindole，中文全稱4’,6-聯(lián)脒-2’-苯基吲哚，是一種藍(lán)色熒光染料，選擇性結(jié)合雙鏈DNA的小溝區(qū)（優(yōu)先結(jié)合AT富集的DNA）形成穩(wěn)定的復(fù)合物，產(chǎn)生比DAPI約強(qiáng)20倍的熒光。DAPI的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為340

/488nm，DAPI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為364/454nm，通常用作熒光顯微術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)和染色體染色的細(xì)胞核復(fù)染劑。由于對(duì)DNA的高親和性，DAPI還常常被用在細(xì)胞計(jì)數(shù)、凋亡檢測(cè)、支原體污染檢測(cè)、基于DNA內(nèi)含物的細(xì)胞分選，以及高內(nèi)涵成像分析中的核分割工具。雖然高濃度情況下DAPI能夠進(jìn)入活細(xì)胞，但DAPI不具細(xì)胞膜滲透性，通常情況用來(lái)染固定細(xì)胞。對(duì)于活細(xì)胞染色，Hoechst 33342（貨號(hào)：NBS8032-10mg）是一種受歡迎的具細(xì)胞膜滲透性的核復(fù)染劑。

本品為DAPI的二鹽酸鹽（2HCl），粉末形式，易溶于水。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。

保存條件: 

室溫干燥避光保存，2年有效。

產(chǎn)品特性：

1） CAS NO：28718-90-3

2） 英文同義名：DAPI dihydrochloride; 4’,6-Diamidino-2’-phenylindole dihydrochloride; 2-(4-Amidinophenyl)- 6-indolecarbamidine dihydrochloride; 4′,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride;

3） 中文同義名：DAPI二鹽酸鹽；4’,6-聯(lián)脒-2’-苯基吲哚二鹽酸鹽；

4） 分子式：C₁₆H₁₅N₅· 2HCl

5） 分子量：350.25

6） 純度：>90% (from N)

7） 溶解性：溶于水（1-5mg/ml）

8） Ex/Em：340/488nm（DAPI）；364/454nm（DAPI-DNA）；

儲(chǔ)存液配制：

用雙蒸水溶解，配制1-5mg/ml的儲(chǔ)存液。-20oC避光保存1年，建議分裝保存，避免反復(fù)凍融。【注意】：本品不可以用緩沖液直接溶解。

使用方法：

1. 工作液配制

用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作濃度（0.5-10μg/ml）。

2. 固定的細(xì)胞或組織染色

對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI染色。

2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5min。

2.2 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=364/454nm。

3. 活的細(xì)胞或組織染色

3.1 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。對(duì)于六孔板，一個(gè)孔通常需加入1ml染色液；對(duì)于96孔板，一個(gè)孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20min。

3.3 用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

3.4 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=364/454nm。

注意事項(xiàng)：

1.      DAPI對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2.      熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

3.      為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。