Filipin Complex, ≥70% 菲律賓菌素復合物

產品簡介：

菲律賓菌素復合物（Filipin Complex）最早是分離自菲律賓鏈霉菌（S. filipinensis）培養物的一種多烯大環內酯類抗生素和抗真菌藥物，具8種異構體成分，其中菲律賓菌素 III（Filipin III）為主要組分。菲律賓菌素復合物（135 μg/ml）抑制釀酒酵母的細胞生長和線粒體末端電子傳遞。水溶新溶液和真菌細胞膜上，菲律賓菌素復合物（50 μg/ml）與各種固醇結合，特別是24α-甲基膽固醇、24α-乙基膽固醇和膽固醇，誘導紋孔膜生成和細胞內含物泄露。菲律賓菌素復合物是熒光化合物，能標記生物結構的固醇用于成像分析，最大激發和發射波長分別是338和480nm。

產品特性：

1）CAS NO.：11078-21-0

2）同義名：U-5956

3）分子式：C35H58O11(for Filipin III)

4）分子量：654.8

5）純度：≥70%（MX5214A）；≥95%（MX5214B）；

6）外觀：固體

7）溶解性：溶于DMSO、DMF、乙醇、甲醇

8）化學結構圖：

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

產品使用：

以下是針對細胞樣本的染色方法，僅作參考。用戶需根據實際染色樣本和染色條件來優化。

1、儲存液的制備

將低溫保存的固體平衡至室溫至少20min，低速離心后，于無菌工作臺內加入適量有機溶劑（比如：無水高質量DMSO）配置成10mg/ml的儲存液。

2、工作液的制備

于正式實驗前，用PBS、HBSS或其他生理緩沖液稀釋儲存液，到所需的工作濃度，比如：10-100μg/ml。最佳的工作濃度請參閱文獻或自行設置梯度濃度進行摸索。工作液必須現配現用。

3、染色步驟（室溫進行）

應用示例（來自文獻，僅做參考）

1）用Filipin 進行細胞染色，步驟如下：j用DMSO溶解Filipin制備25mg/ml儲存液，分裝成小份，置于-20℃密封保存后置于干燥盒內。每次小樣使用后即丟棄，不可再次凍存。k用生理鹽清洗細胞，用1.5%多聚甲醛固定細胞；l用生理鹽再次清洗；m用生理鹽稀釋Filipin制備成50μg/ml Filipin，室溫孵育45min；n用生理鹽清洗細胞3次；o用360/40nm激發和480/40nm發射濾片并帶365nm二色向長帶通濾片進行成像分析（其他相似的UV濾片也可以）。 

2）用Filipin染色檢測膽固醇再分布和外流。精子懸液離心后去除培養液，之后立即用溶于PBS的4%多聚甲醛固定30min。清洗2次后，用稀釋于PBS的Filipin重懸（工作濃度：83μg/ml），室溫標記1h，輕輕震蕩，且避光。清洗細胞去除多余Filipin，之后重懸于含0.05% NaN3的PBS中用于短期保存。樣本保存在4℃（＜1周），用于后續的成像分析或流式評估。流式分析，用UV激發器（355nm）和550/40nm寬帶通濾片來檢測熒光；成像分析，染色后的精子置于蓋玻片上，風干后，用Prolong Diamond抗熒光封片劑減緩熒光漂白，之后用安裝有UV濾片組（360/20nm寬帶通激發濾片，400nm二向色鏡和425nm長帶通發射濾片）的熒光顯微鏡觀察。 

注意事項：

1.      為了讓化合物更好的溶解，可通過37℃加熱或（和）超聲波水浴中震動片刻來處理。若實驗所需濃度過大甚至達產品溶解極限，請添加助溶劑助溶或自行調整濃度。

2.      菲律賓菌素復合物與膽固醇的相互作用會改變吸收和熒光光譜，為此，在做熒光顯微鏡成像分析時，使用340-380nm作為激發波長，385-470nm作為發射波長。

3.      菲律賓菌素復合物的結合破壞脂質雙分子層結構，因此，不適合用于活細胞染色。

4.      菲律賓菌素復合物的熒光染色漂白非常迅速，因此，染色后樣本務必盡快分析。

5.      菲律賓菌素復合物溶液對光和空氣都非常敏感。條件允許的話，配置好的溶液分裝凍存，且充入惰性氣體，-80℃分裝凍存，避免反復凍融。

6.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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