Filipin Complex, ≥70% 菲律賓菌素復(fù)合物

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

菲律賓菌素復(fù)合物（Filipin Complex）最早是分離自菲律賓鏈霉菌（S. filipinensis）培養(yǎng)物的一種多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和抗真菌藥物，具8種異構(gòu)體成分，其中菲律賓菌素 III（Filipin III）為主要組分。菲律賓菌素復(fù)合物（135 μg/ml）抑制釀酒酵母的細(xì)胞生長(zhǎng)和線粒體末端電子傳遞。水溶新溶液和真菌細(xì)胞膜上，菲律賓菌素復(fù)合物（50 μg/ml）與各種固醇結(jié)合，特別是24α-甲基膽固醇、24α-乙基膽固醇和膽固醇，誘導(dǎo)紋孔膜生成和細(xì)胞內(nèi)含物泄露。菲律賓菌素復(fù)合物是熒光化合物，能標(biāo)記生物結(jié)構(gòu)的固醇用于成像分析，最大激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別是338和480nm。

產(chǎn)品特性：

1）CAS NO.：11078-21-0

2）同義名：U-5956

3）分子式：C35H58O11(for Filipin III)

4）分子量：654.8

5）純度：≥70%（MX5214A）；≥95%（MX5214B）；

6）外觀：固體

7）溶解性：溶于DMSO、DMF、乙醇、甲醇

8）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

產(chǎn)品使用：

以下是針對(duì)細(xì)胞樣本的染色方法，僅作參考。用戶需根據(jù)實(shí)際染色樣本和染色條件來(lái)優(yōu)化。

1、儲(chǔ)存液的制備

將低溫保存的固體平衡至室溫至少20min，低速離心后，于無(wú)菌工作臺(tái)內(nèi)加入適量有機(jī)溶劑（比如：無(wú)水高質(zhì)量DMSO）配置成10mg/ml的儲(chǔ)存液。

2、工作液的制備

于正式實(shí)驗(yàn)前，用PBS、HBSS或其他生理緩沖液稀釋儲(chǔ)存液，到所需的工作濃度，比如：10-100μg/ml。最佳的工作濃度請(qǐng)參閱文獻(xiàn)或自行設(shè)置梯度濃度進(jìn)行摸索。工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、染色步驟（室溫進(jìn)行）

應(yīng)用示例（來(lái)自文獻(xiàn)，僅做參考）

1）用Filipin 進(jìn)行細(xì)胞染色，步驟如下：j用DMSO溶解Filipin制備25mg/ml儲(chǔ)存液，分裝成小份，置于-20℃密封保存后置于干燥盒內(nèi)。每次小樣使用后即丟棄，不可再次凍存。k用生理鹽清洗細(xì)胞，用1.5%多聚甲醛固定細(xì)胞；l用生理鹽再次清洗；m用生理鹽稀釋Filipin制備成50μg/ml Filipin，室溫孵育45min；n用生理鹽清洗細(xì)胞3次；o用360/40nm激發(fā)和480/40nm發(fā)射濾片并帶365nm二色向長(zhǎng)帶通濾片進(jìn)行成像分析（其他相似的UV濾片也可以）。 

2）用Filipin染色檢測(cè)膽固醇再分布和外流。精子懸液離心后去除培養(yǎng)液，之后立即用溶于PBS的4%多聚甲醛固定30min。清洗2次后，用稀釋于PBS的Filipin重懸（工作濃度：83μg/ml），室溫標(biāo)記1h，輕輕震蕩，且避光。清洗細(xì)胞去除多余Filipin，之后重懸于含0.05% NaN3的PBS中用于短期保存。樣本保存在4℃（＜1周），用于后續(xù)的成像分析或流式評(píng)估。流式分析，用UV激發(fā)器（355nm）和550/40nm寬帶通濾片來(lái)檢測(cè)熒光；成像分析，染色后的精子置于蓋玻片上，風(fēng)干后，用Prolong Diamond抗熒光封片劑減緩熒光漂白，之后用安裝有UV濾片組（360/20nm寬帶通激發(fā)濾片，400nm二向色鏡和425nm長(zhǎng)帶通發(fā)射濾片）的熒光顯微鏡觀察。 

注意事項(xiàng)：

1.      為了讓化合物更好的溶解，可通過(guò)37℃加熱或（和）超聲波水浴中震動(dòng)片刻來(lái)處理。若實(shí)驗(yàn)所需濃度過(guò)大甚至達(dá)產(chǎn)品溶解極限，請(qǐng)?zhí)砑又軇┲芑蜃孕姓{(diào)整濃度。

2.      菲律賓菌素復(fù)合物與膽固醇的相互作用會(huì)改變吸收和熒光光譜，為此，在做熒光顯微鏡成像分析時(shí)，使用340-380nm作為激發(fā)波長(zhǎng)，385-470nm作為發(fā)射波長(zhǎng)。

3.      菲律賓菌素復(fù)合物的結(jié)合破壞脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)，因此，不適合用于活細(xì)胞染色。

4.      菲律賓菌素復(fù)合物的熒光染色漂白非常迅速，因此，染色后樣本務(wù)必盡快分析。

5.      菲律賓菌素復(fù)合物溶液對(duì)光和空氣都非常敏感。條件允許的話，配置好的溶液分裝凍存，且充入惰性氣體，-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。

6.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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