Di-8-ANEPPS 膜電位熒光探針

【溫馨提示】：見我司整理的膜電位熒光探針產品專題。

產品簡介：

ANEP (AminoNaphthylEthenylPyridinium)染料由Leslie Loew和同事開發，是最靈敏且穩定的快速響應探針，能檢測亞毫秒級的膜電位變化。Di-4-ANEPPS（貨號：NBS3227）和Di-8-ANEPPS（貨號：NBS3228）在各種組織、細胞和模型膜系統中表現出相當一致的熒光強度變化率（10%熒光變化/100mV）。ANEP染料的電子結構發生變化，從而，它們的熒光光譜對周圍的電場變化做出響應。這些光學響應足夠快來檢測興奮細胞（包括單個神經元、心肌細胞和完整組織制備物）的瞬時電位變化。另外，ANEP染料的激發光譜呈現出電位依賴的遷移，從而使其能通過測定激發波長下的熒光比來定量膜電位。ANEP染料結構上的差異使其適用于各種特定應用。

電位敏感ANEP染料的特征：

① 兩性離子分子，在不同細胞和組織樣本中表現出最穩定的電位響應。

② 結合到磷脂膜上的最大激發和發射波長約為465/635nm【但光譜特征與環境密切關聯】

③ 非熒光直至結合到膜上

④ 溶于乙醇、DMSO和DMF【Di-2-ANEPEQ（貨號：NBS3229）是水溶性的ANEP染料】

⑤ 快速響應探針，適用于檢測亞毫秒的膜電位變化

Di-8-ANEPPS與Di-4-ANEPPS（貨號：NBS3227）相比，具更好的親脂性，染料能更好的保留在細胞質膜外層，因而更加適用于長期膜電位研究。Di-8-ANEPPS比Di-4-ANEPPS（貨號：NBS3227）具更好的光穩定性和更低的光毒性。

基本特性：

1） CAS NO：157134-53-7

2） 化學名：Pyridinium, 4-[2-[6-(dioctylamino)-2-naphthalenyl]ethenyl]-1-(3-sulfopropyl)-, inner salt

3） 分子式：C36H52N2O3S 

4） 分子量：592.87g/mol

5） 外觀：橙色至暗紅色固體

6） 純度：≥95%（HPLC）

7） 熒光：λex 498 nm, λem 713 nm in methanol【需注意：相較于在有機溶劑內，苯乙烯染料與脂質結合后通常發生很大的藍光遷移】

8） 溶解性：溶于DMSO、乙醇、DMF

9）化學結構圖：

保存條件: 

+4℃干燥避光保存，可置于-20℃長期干燥避光保存，2年有效。

產品使用：

1.儲存液制備

將低溫保存的凍干粉置于室溫回溫至少20min，低速離心后，將其溶于有機溶劑比如乙醇、DMSO或DMF配制成1mg/ml（~2mM）的儲存液。將儲存液避光保存在+4℃。

2.ANEP染料的細胞加載

2.1批量加載

爬片培養的貼壁細胞一般通過將少量的染料儲存液（比如溶于DMSO）加入細胞培養基（終濃度為0.2-2μM）進行標記即可。更高的染料濃度（10-50μM）用于標記灌注的組織樣本。通常要加0.05% Pluronic?F-127（貨號：NBS2009）在標記溶液內，以提高染料的溶解（對于親脂性更高的ANEP染料比如Di-8-ANEPPS尤其不能省略）。低標記溫度（4

-20℃）能抑制染料的內在化。含探針的溶液孵育10-20min，細胞用不含染料的培養基清洗3次。

2.2逆行標記

特定的神經元群細胞可通過定位壓力注射高濃度的染料溶液（10-20mg/ml，溶于DMSO或乙醇）進入神經組織來實現標記。

3.熒光測定

一般通過記錄激發在450nm和510nm，發射在＞570nm處的熒光強度來進行熒光比率成像測定。當膜超極化，熒光強度比率（F450/F510）降低。電位響應的校準可通過使用離子載體纈氨霉素和添加不同鉀離子濃度到細胞外培養基來調整多種膜電位來實現。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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