DiOC6(3) 內質網熒光探針

【溫馨提示】：見我司整理的膜電位熒光探針產品專題。

產品簡介：

DiOC6(3)，英文全名3,3'-Dihexyloxacarbocyanine Iodide，CAS NO. 53213-82-4，是一種具細胞膜滲透性、發綠色熒光的親脂性染料。作為一種膜探針，DiOC6(3)在高濃度下能對活細胞和固定細胞的內質網（高爾基體）染色，也能對囊泡膜和線粒體染色。而在更低濃度下，偏向選擇性染色線粒體。DiOC6(3)能用來標記活細胞，然而，由于光動力學毒性會快速破損，經其標記的細胞僅能短時間暴露在光下。神經元和酵母細胞中，DiOC6(3)曾用來研究內質網（ER）結構的相互作用和動力學；當染料濃度提高或在某些呼吸缺陷的酵母菌株內，DiOC6(3)能特異性染酵母核膜，而且具足夠靈敏性來揭式核膜（已知稱為karmellae）的變化。

產品特性：

1）  CAS NO.：53213-82-4

2）  化學名：Benzoxazolium, 3-hexyl-2-(3-(3-hexyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl)-, iodide

3）  同義名：3,3'-Dihexyloxacarbocyanine Iodide; DiOC6(3) Iodide;

4）  分子式：C29H37IN2O2

5）  分子量：572.52

6）  純度：≥97%（HPLC）

7）  Ex/Em：484/501nm（in methanol）

8）  外觀：紅色粉末或塊狀

9）  溶解性：溶于DMSO，DMF，無水乙醇，微溶于水

10）化學結構圖：

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少一年有效。

產品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據具體的實驗條件和具體的應用來做出調整。

1. 染色液制備

1） 儲存液制備：用 DMSO或無水乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取10mg DiOC6(3)（Mw：572.52 g/mol）溶于3.49ml 無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液。【注意】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，且要避光保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5 μM的工作濃度。【注意】：工作液最終濃度需要根據不同細胞系和實驗體系來優化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區間進行最優濃度的摸索。

2. 懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長培養液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。

2）從培養基中移走蓋玻片，濾掉過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的小室內。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化以保證得到均一化的標記結果。

5）吸掉染色工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養基。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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