藍色溶酶體熒光探針

LysoTracker Blue DND-22

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產(chǎn)品簡介：

Lysotracker探針是向酸性熒光探針，用于活細胞內酸性細胞器的標記和示蹤。這些探針具有幾個重要特征，包括高度選擇靶向酸性細胞器和納摩爾濃度有效標記活細胞。另外，LysoTracker系列有幾種熒光顏色，特別適合用于多色標記實驗。

Lysotracker探針，含一連接到弱堿基上的熒光素，中性pH下呈部分質子化，能夠自由穿透細胞膜且典型聚集在球形細胞器上。研究發(fā)現(xiàn)，Lysotracker探針必須在極低濃度（通常約50nM）下才能獲得優(yōu)異的選擇性。這些探針的滯留機制雖然沒有被完全研究透，但很可能與酸性細胞器的質子化和滯留性有關，即使后續(xù)的弱堿性細胞滲透化合物處理細胞通常不會可逆化染色結果。Lysotracker探針的內吞化動力學研究顯示染料進入活細胞的攝入速率僅幾秒即可。然而，這些溶酶體探針會導致溶酶體被堿化，比如長期孵育會誘使溶酶體pH的增加。因此，建議成像前用探針孵育細胞的時間僅1-5min就好。

LysoTracker Blue DND-22 是對活細胞中的酸性區(qū)室進行染色的一種藍色熒光染料，具有 ~373/422 nm 的最大激發(fā)/發(fā)射波長。本品為DMSO儲存液，濃度為1mM。用于活細胞的溶酶體染色，建議工作濃度為50-75 nM，需根據(jù)實際情況做優(yōu)化調整。

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，12個月有效，避免反復凍融。

產(chǎn)品特征：

1）分子式：C₂₄H₃₈Cl₄N₄

2）分子量：524.403

3）外觀：無色液體

4）Ex/Em：373/422 nm 

5）化學結構圖：

產(chǎn)品使用：

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡單低速離心使溶液降至管底。第一次使用請將本品按單次用量分裝保存，≤-20°C避光干燥保存，盡量避免反復凍融。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用生長培養(yǎng)基或合適的緩沖液將 1mM 儲存液稀釋至工作濃度，工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。對于 Lysotracker 系列溶酶體探針，推薦工作液濃度為 50-75nM；
【注意】：

1）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

2）若細胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會觀察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現(xiàn)象。

2. 染色步驟（貼壁細胞）
1）將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。
2）待細胞生長到合適密度，吸除培養(yǎng)液，加入適量 37℃預熱的含探針培養(yǎng)基（必須完全覆蓋住細胞），在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h（具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定）。
3）利用不含探針的新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液，并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察（見附表1）。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間，使得染料能聚集在溶酶體上。

3. 染色步驟（懸浮細胞）
1）離心沉淀細胞，吸除上清。
2）利用適量 37℃預熱的含探針培養(yǎng)基重懸細胞，在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h（具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定）。
3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。
4）用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察（見附表1）。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間，使得染料能聚集在溶酶體上。

附表1. Lysotracker&Lysosensor系列溶酶體探針的光譜總結：

注意事項：

1.      整個染色過程中需注意避光。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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