綠色溶酶體熒光探針

LysoTracker Green DND-26

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Lysotracker探針是向酸性熒光探針，用于活細(xì)胞內(nèi)酸性細(xì)胞器的標(biāo)記和示蹤。這些探針具有幾個(gè)重要特征，包括高度選擇靶向酸性細(xì)胞器和納摩爾濃度有效標(biāo)記活細(xì)胞。另外，LysoTracker系列有幾種熒光顏色，特別適合用于多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。

Lysotracker探針，含一連接到弱堿基上的熒光素，中性pH下呈部分質(zhì)子化，能夠自由穿透細(xì)胞膜且典型聚集在球形細(xì)胞器上。研究發(fā)現(xiàn)，Lysotracker探針必須在極低濃度（通常約50nM）下才能獲得優(yōu)異的選擇性。這些探針的滯留機(jī)制雖然沒(méi)有被完全研究透，但很可能與酸性細(xì)胞器的質(zhì)子化和滯留性有關(guān)，即使后續(xù)的弱堿性細(xì)胞滲透化合物處理細(xì)胞通常不會(huì)可逆化染色結(jié)果。Lysotracker探針的內(nèi)吞化動(dòng)力學(xué)研究顯示染料進(jìn)入活細(xì)胞的攝入速率僅幾秒即可。然而，這些溶酶體探針會(huì)導(dǎo)致溶酶體被堿化，比如長(zhǎng)期孵育會(huì)誘使溶酶體pH的增加。因此，建議成像前用探針?lè)跤?xì)胞的時(shí)間僅1-5min就好。

LysoTracker Green DND-26是對(duì)活細(xì)胞中的酸性區(qū)室進(jìn)行染色的一種綠色熒光染料，具有504/511 nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。本品為DMSO儲(chǔ)存液，濃度為1mM。用于活細(xì)胞的溶酶體染色，建議工作濃度為50-75 nM，需根據(jù)實(shí)際情況做優(yōu)化調(diào)整。

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，12個(gè)月有效，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品特征：

1）分子式：C₁₈H₂₆BClF₂N₄O

2）分子量：398.6894

3）外觀：黃色液體

4）Ex/Em：504/511nm

5）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖

產(chǎn)品使用：

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)單低速離心使溶液降至管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用生長(zhǎng)培養(yǎng)基或合適的緩沖液將1mM儲(chǔ)存液稀釋至工作濃度，工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。對(duì)于Lysotracker系列溶酶體探針，推薦工作液濃度為50-75nM；
【注意】：

1）為了降低探針加載過(guò)度可能引起的假陽(yáng)性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

2）若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會(huì)觀察到熒光信號(hào)的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。

2. 染色步驟（貼壁細(xì)胞）
1）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長(zhǎng)。
2）待細(xì)胞生長(zhǎng)到合適密度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基（必須完全覆蓋住細(xì)胞），在適合特定細(xì)胞類(lèi)型的生長(zhǎng)條件下孵育細(xì)胞30min-2h（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型而定）。
3）利用不含探針的新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液，并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察（見(jiàn)附表1）。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間，使得染料能聚集在溶酶體上。

【注意】：對(duì)Lysotracker Green DND-26的內(nèi)化（Internalization）進(jìn)行動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，活細(xì)胞攝取此探針的速率在幾秒之內(nèi)即可完成。然而嚴(yán)重不足的是，該探針展示出溶酶體“堿化效應(yīng)”，從而，長(zhǎng)時(shí)間孵育會(huì)導(dǎo)致溶酶體pH上升。因此，僅僅當(dāng)此探針于37℃孵育細(xì)胞1-5min，才是有用的pH指示劑。

3. 染色步驟（懸浮細(xì)胞）
1）離心沉淀細(xì)胞，吸除上清。
2）利用適量37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，在適合特定細(xì)胞類(lèi)型的生長(zhǎng)條件下孵育細(xì)胞30min-2h（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型而定）。
3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
4）用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察（見(jiàn)附表1）。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間，使得染料能聚集在溶酶體上。
【注意】：另一種方法，懸浮細(xì)胞可能會(huì)粘附到經(jīng)BD Cell-Tak處理的蓋玻片上，此時(shí)，可用類(lèi)似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。

附表1. Lysotracker&Lysosensor系列溶酶體探針的光譜總結(jié)：

注意事項(xiàng)：

1.      整個(gè)染色過(guò)程中需注意避光。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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