一氧化氮（NO）分析專用裂解液

Lysis Buffer for Nitric Oxide Assay

產品簡介：

一氧化氮分析專用裂解液（Lysis Buffer for Nitric Oxide Assay）是一款專門開發用于一氧化氮或總一氧化氮檢測用的細胞或組織裂解液。使用本品裂解所得的樣品，可用我公司的一氧化氮檢測試劑盒（貨號：NBS5939）或總一氧化氮檢測試劑盒（貨號：NBS5940）進行檢測。

本品不含蛋白酶和磷酸酶抑制劑，由于添加抑制劑可能會干擾后續的一氧化氮檢測。經本品裂解細胞或組織所得的蛋白樣品，可使用增強型BCA蛋白濃度測定試劑盒測定總蛋白濃度。

保存條件: 

-20℃凍存，1年穩定。

產品使用：

A， 培養的細胞樣品

1） 充分融解一氧化氮分析專用裂解液，之后混勻待用。

貼壁細胞：吸除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照六孔板的每孔細胞加入100-200μl裂解液的比例加量。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解15~30min，通常裂解液接觸細胞1-3秒后，細胞就會被裂解。

懸浮細胞：離心收集細胞，用手指彈散細胞。按照六孔板的每孔細胞加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必須分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

【裂解液用量說明】：通常6孔板每孔細胞加入100μl裂解液已經足夠，如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150μl或200μl。

2） 充分裂解后，10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的一氧化氮或蛋白濃度測定等實驗。樣品制備后如果當日不能完成檢測，可以-20℃保存，但仍建議盡快完成檢測。

B， 組織樣品

1） 充分融解一氧化氮分析專用裂解液，之后混勻待用。

2） 將組織剪切成細小的碎片，越小越好。取在液氮或超低溫冰箱冷凍30分鐘以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程控制在1-2min內，以減少蛋白的降解。

3） 按照每20mg組織加入100-200μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以適當添加用量，如果需要高濃度的樣品，可適當降低用量。】

 4） 用玻璃勻漿器或組織勻漿器勻漿直至充分裂解。（如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品裂解充分，之后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分。）

5） 充分裂解后，10,000-14,000g離心3-5min，取上清，即可進行后續的一氧化氮或蛋白濃度測定等實驗。樣品制備后如果當日不能完成檢測，可以-20℃保存，但仍建議盡快完成檢測。

注意事項：

1.      裂解樣品的所有步驟需在冰上或4℃進行。

2.      本品可耐受反復凍融。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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