EZ poly?in vivo mRNA活體轉染試劑

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產品簡介:

EZ poly?in vivo mRNA活體轉染試劑是一款體內專用型基因轉染試劑，可通過肌肉注射的方式將mRNA遞送傳送至體內并在注射部位高效表達目的蛋白。與其它mRNA專用體內轉染試劑相比，具有操作簡便、體內毒性低、穩定性好、體內轉染效率及蛋白表達量高等優點。

應用范圍:

EZ poly?in vivo mRNA活體轉染試劑可被應用于mRNA疫苗研發或基因治療等相關工作的研究中。可用于遞送熒光標記的mRNA或具有特殊功能的mRNA，并在體內高效表達。可滿足基礎科研、初期工藝開發及臨床前實驗研究使用。

保存條件: 

2-8℃保存一年

運輸：

常溫運輸

體內轉染方法:

以體重20g小鼠，mRNA注射10μg為例，參考表1調整，步驟如下：

體內轉染條件的優化:

可通過改變mRNA的用量和濃度以及EZ poly?in vivo mRNA活體轉染試劑體內轉染試劑濃度對體內分布或蛋白表達情況進行優化。EZ poly?in vivo mRNA活體轉染試劑(μL): mRNA (μg)可以在4:1和2:1之間調整。根據鼠體重的不同，葡萄糖注射液的補加體積可以在推薦量±30μL之間調節。優化方法參考表2。使用熒光標記mRNA的活體分布實驗，建議在注射后4-6小時開始檢測，熒光素酶標記mRNA的活體分布實驗，建議在注射后6小時開始檢測。

表1.  不同體重鼠的體內用量推薦

表2.  體重20g鼠的優化復合方式推薦

一：轉染效率低

影響細胞轉染效率的因素有很多。首先，與所轉染細胞有關，有的細胞容易轉染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細胞不易轉染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉染試劑的用量及與DNA的比例有關，在最佳的轉染比例附近可以達到最佳的轉染效果。最后，沒有使用最適宜的細胞密度，應根據各種轉染試劑的說明書中推薦的細胞密度進行細胞接種，更有利于提高轉染效率。

二：轉染效果不穩定，不能重現

轉染效果不穩定一般與兩個因素緊密相關，一個是轉染試劑的穩定性，另一個是基因的穩定性。轉染試劑應按照說明書建議的保存溫度及條件進行保存。如使用脂質體類的轉染試劑，則不建議反復凍融，會引起該轉染試劑結構上的變化。基因如短時間內連續使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲存以降低核酸的降解速度。

三：細胞毒性大

導致轉染時細胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉染試劑的用量過大、轉染時細胞狀態較差以及培養基中抗生素的加入等。建議嚴格按照所選擇轉染試劑的說明書進行操作，以避免細胞毒性大的問題。

四：沒有生成高效率的DNA轉染試劑復合物

沒有生成高效復合物的因素有很多。首先，可能是沒有選對合適的轉染試劑。挑選轉染試劑時應考慮基因的種類及分子量等因素。其次，有的轉染試劑對血清的影響很大，應在無血清情況下進行轉染。使用諾寧生物的EZ poly?  系列轉染試劑無需考慮血清對轉染體系的影響，可在含血清培養基中進行轉染。

五：使用錯誤的轉染操作步驟

無論使用哪一款基因轉染試劑，都應嚴格按照該轉染試劑的說明書進行操作，其中包括轉染試劑的用量、基因用量、最佳轉染比例、孵育時間、檢測時間等重要因素。

六：轉染試劑有時呈云霧狀渾濁

如發現轉染試劑出現云霧狀渾濁應立即聯系客服人員。基因轉染試劑一般都呈清澈透明狀態，呈云霧狀渾濁可能是由于轉染試劑發生了污染或儲存溫度太低，請務必按照試劑說明書要求的溫度進行儲存。如出現此現象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。

七：轉染復合物出現沉淀

當轉染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復合物的孵育體系體積小于說明書建議時，由于體系中過量的電荷發生了聚集會導致體系中的復合物出現沉淀。建議要嚴格參考說明書的用量進行轉染。

八：siRNA轉染時，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環境中的RNA酶污染降解？或所使用的細胞是否為難轉染細胞？以及是否按照說明書建議的用量進行了操作等。首先應該選擇合適的siRNA基因轉染試劑，確保細胞密度在60-70%之間，并嚴格按照說明書建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉染時，基因沉默效率不夠高

當細胞同時轉染DNA和siRNA時，建議使用分別轉染的方式進行。即使用基因轉染試劑分別與DNA和siRNA進行復合，再將兩個復合物體系分兩次分別加入到同一個裝有細胞的實驗孔中。因DNA和RNA的轉染機理不相同，如只想使用一種轉染試劑同時轉染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產品，即可以轉染DNA又可以轉染RNA。