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<NBS5836> iFluor 488 Phalloidin iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

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<NBS5836> iFluor 488 Phalloidin iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

iFluor 488 Phalloidin iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽
貨號(hào):NBS5836-300T
品牌:NoninBio
價(jià)格: 2985.00
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300T

 

iFluorTM 488 Phalloidin iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS5836-300T

iFluor 488 Phalloidin iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

【溫馨提示】:見(jiàn)我司整理的鬼筆環(huán)肽及偶聯(lián)物(Phalloidin and Phalloidin Conjugates)產(chǎn)品專題

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

鬼筆環(huán)肽(Phalloidin),又稱鬼筆鵝膏素,最初是從毒蘑菇鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)中分離到的一種七肽毒素,以極高的親和力和特異性結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲F-actin(聚合形式的肌動(dòng)蛋白),不會(huì)結(jié)合單體肌動(dòng)蛋白(G-actin)。不像肌動(dòng)蛋白抗體,同時(shí)識(shí)別單體和聚合形式的肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽對(duì)大小纖維的親和力相近,在許多不同的動(dòng)植物物種的肌肉和非肌肉細(xì)胞中,基本都按照一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的化學(xué)計(jì)量比結(jié)合。不像肌動(dòng)蛋白抗體,對(duì)不同物種或來(lái)源的肌動(dòng)蛋白親和力會(huì)發(fā)生明顯變化。鬼筆環(huán)肽的非特異性結(jié)合幾乎可忽略,染色和未染色區(qū)域的差異極其明顯。鬼筆環(huán)肽使得肌動(dòng)蛋白聚合/解離的臨界濃度降至1μg/ml,可用作一種聚合增強(qiáng)劑。另外,產(chǎn)生的復(fù)合物高度穩(wěn)定(解離常數(shù)約3×10–8M),能夠抑制細(xì)胞松弛素、碘化鉀和溫度上升引起的去聚合和去組裝活性。

鬼筆環(huán)肽及其衍生物在納摩爾濃度即可對(duì)F-actin染色,且水溶性良好,是非常實(shí)用和方便的探針,對(duì)組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞體系內(nèi)的F-actin進(jìn)行定性和定量研究。另外,鬼筆環(huán)肽及其衍生物很小,直徑約12–15 ?,分子量<2000 Da,經(jīng)標(biāo)記后的F-actin仍維持許多標(biāo)記前的功能。比如,標(biāo)記的甘油抽提肌纖維仍能收縮;標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白絲仍能在固相肌球蛋白基質(zhì)中移動(dòng)。

本品為iFluor 488熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(iFluor 488-Phalloidin),以溶于DMSO的儲(chǔ)存液形式提供,按照100μl/孔(96孔板),總共可做300次。

 

產(chǎn)品特點(diǎn):

1.  選擇性染色F-actin,優(yōu)于抗體染色法,具更高的特異性和更低的非特異背景。

2.  優(yōu)秀的熒光亮度和穩(wěn)定性,類同于Alexa Fluor488-PhalloidinEx/Em=492/518

3.  優(yōu)化用于固定和透化處理樣本。

4.  適用于多重標(biāo)記應(yīng)用,與其他熒光染料包括熒光蛋白、Qdot熒光納米晶和其他包括二抗在內(nèi)的熒光偶聯(lián)物完全兼容。


保存條件

-20℃避光干燥保存,1年有效。

 

操作流程(免疫熒光染色)

有幾種方法都能用來(lái)染色組織細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)的肌動(dòng)蛋白絲(F-actin)染色,其中,固定步驟在獲得可信且具代表性的細(xì)胞F-actin分布情況中至關(guān)重要。固定步驟基于實(shí)驗(yàn)自身需求來(lái)選擇。多聚甲醛或戊二醛都能得到優(yōu)秀的F-actin染色和良好的板狀偽足維持保存。

一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

1.1 iFluor 488 Phalloidin(Cat# NBS5836

1.2 1.2 1 x PBS緩沖液(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別)(Cat# NBS3021

1.3 固定液(溶于PBS4%多聚甲醛,pH 7.0)(Cat# NBS0135

1.4 破膜液(溶于PBS0.5% Triton X-100

1.5 抗熒光淬滅劑(Fluoromount-G抗熒光淬滅封片劑,Cat# NBS0032DAPI Fluoromount-G 抗熒光淬滅封片劑,Cat# NBS0033

1.6 即用型DAPI染液(Cat# NBS1206

1.7 (可選)牛血清白蛋白 (第五組分)(Bovine Serum Albumin,BSA(Cat# NBS0218

1.8 黑框/透明底的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板

二、染色工作液準(zhǔn)備

2.1 于實(shí)驗(yàn)前將低溫保存的iFluor 488 Phalloidin置于室溫回溫至少20min,低速離心后才開(kāi)瓶。第一次使用請(qǐng)將本品按照單次用量進(jìn)行分裝,置于-20℃避光保存,一年穩(wěn)定。

2.2 本品以1000×DMSO儲(chǔ)存液形式提供。開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前,使用1×PBS BufferpH 7.4)將其稀釋到染色工作液(比如1μl儲(chǔ)存液加入1ml PBS Buffer),用槍吹勻即可。

【注】:以96孔板為檢測(cè)體系,按照100μl/孔來(lái)計(jì)算,準(zhǔn)備足量的染色工作液;也可對(duì)細(xì)胞爬片進(jìn)行染色,但需調(diào)整染色工作液的用量,以能覆蓋住細(xì)胞為準(zhǔn)。

【注】:最佳的工作濃度和孵育時(shí)間取決于特定的應(yīng)用。根據(jù)特定的細(xì)胞類型和/或細(xì)胞/組織對(duì)探針的通透性來(lái)調(diào)整合適的染色條件。

【注】:可使用含1% BSAPBS Buffer稀釋儲(chǔ)存液,能夠降低非特異背景染色,也能最小化鬼筆環(huán)肽粘附到管壁的可能性。

【注】:染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用,室溫避光保存。

三、染色流程(以96孔板為例)

3.1 用黑框/透明底的96孔板進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),使其貼壁生長(zhǎng)達(dá)到70-80%的匯合度。

3.2 吸掉培養(yǎng)液,用37℃預(yù)熱的1×PBS BufferpH 7.4)清洗細(xì)胞2次。

3.3 用溶于PBS4%多聚甲醛固定細(xì)胞,室溫固定10-30min。【注意】:固定過(guò)程中甲醇能破壞肌動(dòng)蛋白,因此,固定液中最好避免接觸任何甲醇。最好的固定液是無(wú)甲醇的甲醛。

3.4 1×PBS Buffer清洗細(xì)胞2-3次,室溫下30s/次。

3.5 用破膜緩沖液透化細(xì)胞,室溫處理5min

3.6 1×PBS Buffer清洗細(xì)胞2-3次,室溫下30s/次。

3.7 100μl現(xiàn)配的iFluor 488 Phalloidin染色工作液到每個(gè)孔內(nèi),室溫避光孵育30-90min

【注意】:若有需要,此時(shí)可加入即用型DAPI染色液或其他不同于iFluor 488熒光光譜的細(xì)胞核染色液。

3.8 1×PBS Buffer清洗細(xì)胞2-3次,室溫下30s/次。

3.9 加抗熒光淬滅劑(如Fluoromount-G抗熒光淬滅封片劑,Cat# NBS0032)到孔內(nèi)保護(hù)熒光。

3.10 熒光顯微鏡下觀察染色結(jié)果,選擇iFluor 488激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=492/518nm)。若做細(xì)胞核染色,選擇合適濾片,比如DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=364/454nm)。

 

注意事項(xiàng):

1.      本品具有一定的毒性,LD50=2mg/kg,操作時(shí)請(qǐng)注意防護(hù)。

2.      為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


相關(guān)產(chǎn)品:

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

Ex/Em

分子量

NBS5800-1mg

Phalloidin 鬼筆環(huán)肽

1mg

N/A

~788.87

NBS5829-1mg

Amino Phalloidin 氨基鬼筆環(huán)肽

1mg

N/A

~901.91

NBS5830-300T

FITC Phalloidin FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

492/518

~1100

NBS5831-1mg

FITC Phalloidin (Powder) FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

1mg

492/518

~1100

NBS5832-300T

TRITC Phalloidin TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

546/575

~1000

NBS5833-1mg

TRITC Phalloidin (Powder) TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

1mg

546/575

~1000

NBS5817-1mg

5-TAMRA Phalloidin 5-TAMRA標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

1mg

546/575

~1200

NBS5834-300T

iFluorTM 350 Phalloidin iFluor 350標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

353/442

~1000

NBS5835-300T

iFluorTM 405 Phalloidin iFluor 405標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

400/421

~1400

NBS5836-300T

iFluorTM 488 Phalloidin iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

492/518

~1900

NBS5837-300T

iFluorTM 555 Phalloidin iFluor 555標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

556/574

~1300

NBS5838-300T

iFluorTM 594 Phalloidin iFluor 594標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

590/618

~1600

NBS5839-300T

iFluorTM 647 Phalloidin iFluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

650/665

~2200

NBS5840-300T

iFluorTM 680 Phalloidin iFluor 680標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

681/698

~2700

NBS5841-300T

iFluorTM 790 Phalloidin iFluor 790標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

300T

787/808

~2800


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