EZ poly?mRNA轉染試劑

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產品簡介:

EZ poly?mRNA轉染試劑是一款高性能的mRNA專用轉染試劑，可用于mRNA在多種貼壁細胞中的傳送。可直接將mRNA傳遞到細胞質中進行表達，避免了轉錄調控作用及進入細胞核的限制。可被應用在短期蛋白表達的相關研究工作中。

應用范圍:

EZ poly?mRNA轉染試劑可適用于眾多貼壁或懸浮細胞株的mRNA轉染。在各種常規、難轉、原代細胞及干細胞中均可得到較高的轉染效率，且性能穩定。與其它轉染試劑相比，具有不受血清影響、毒性低、穩定性好、轉染簡單易行、重復性好等優點。

保存條件: 

2-8℃保存一年

運輸：

常溫運輸

mRNA的轉染:

  以24孔板為例，請參考表1的轉染規模調整，步驟如下:

mRNA的轉染優化:

可通過改變細胞密度、mRNA濃度以及EZ poly?mRNA轉染試劑濃度對轉染進行優化。保證細胞融合度在60%以上，EZ poly?mRNA轉染試劑(μL): mRNA (μg)可以在1:1和5:1之間調整。轉染步驟與DNA相同，請參考表1的轉染規模進行調整，所有數量和體積均是按孔計算。轉染高密度細胞可獲得高轉染效率、高表達水平和低細胞毒性。

表1.  不同培養板所需轉染試劑和mRNA的用量

一：轉染效率低

影響細胞轉染效率的因素有很多。首先，與所轉染細胞有關，有的細胞容易轉染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細胞不易轉染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉染試劑的用量及與DNA的比例有關，在最佳的轉染比例附近可以達到最佳的轉染效果。最后，沒有使用最適宜的細胞密度，應根據各種轉染試劑的說明書中推薦的細胞密度進行細胞接種，更有利于提高轉染效率。

二：轉染效果不穩定，不能重現

轉染效果不穩定一般與兩個因素緊密相關，一個是轉染試劑的穩定性，另一個是基因的穩定性。轉染試劑應按照說明書建議的保存溫度及條件進行保存。如使用脂質體類的轉染試劑，則不建議反復凍融，會引起該轉染試劑結構上的變化。基因如短時間內連續使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲存以降低核酸的降解速度。

三：細胞毒性大

導致轉染時細胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉染試劑的用量過大、轉染時細胞狀態較差以及培養基中抗生素的加入等。建議嚴格按照所選擇轉染試劑的說明書進行操作，以避免細胞毒性大的問題。

四：沒有生成高效率的DNA轉染試劑復合物

沒有生成高效復合物的因素有很多。首先，可能是沒有選對合適的轉染試劑。挑選轉染試劑時應考慮基因的種類及分子量等因素。其次，有的轉染試劑對血清的影響很大，應在無血清情況下進行轉染。使用諾寧生物的EZ poly?  系列轉染試劑無需考慮血清對轉染體系的影響，可在含血清培養基中進行轉染。

五：使用錯誤的轉染操作步驟

無論使用哪一款基因轉染試劑，都應嚴格按照該轉染試劑的說明書進行操作，其中包括轉染試劑的用量、基因用量、最佳轉染比例、孵育時間、檢測時間等重要因素。

六：轉染試劑有時呈云霧狀渾濁

如發現轉染試劑出現云霧狀渾濁應立即聯系客服人員。基因轉染試劑一般都呈清澈透明狀態，呈云霧狀渾濁可能是由于轉染試劑發生了污染或儲存溫度太低，請務必按照試劑說明書要求的溫度進行儲存。如出現此現象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。

七：轉染復合物出現沉淀

當轉染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復合物的孵育體系體積小于說明書建議時，由于體系中過量的電荷發生了聚集會導致體系中的復合物出現沉淀。建議要嚴格參考說明書的用量進行轉染。

八：siRNA轉染時，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環境中的RNA酶污染降解？或所使用的細胞是否為難轉染細胞？以及是否按照說明書建議的用量進行了操作等。首先應該選擇合適的siRNA基因轉染試劑，確保細胞密度在60-70%之間，并嚴格按照說明書建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉染時，基因沉默效率不夠高

當細胞同時轉染DNA和siRNA時，建議使用分別轉染的方式進行。即使用基因轉染試劑分別與DNA和siRNA進行復合，再將兩個復合物體系分兩次分別加入到同一個裝有細胞的實驗孔中。因DNA和RNA的轉染機理不相同，如只想使用一種轉染試劑同時轉染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產品，即可以轉染DNA又可以轉染RNA。