Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000線(xiàn)性PEI轉(zhuǎn)染試劑

Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 線(xiàn)性PEI轉(zhuǎn)染試劑

貨號(hào)：NBS2500-1ml，

NBS2500-10ml，

NBS2500-50ml，

品牌：NoninBio

產(chǎn)品描述

線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI 25000，一種高電荷陽(yáng)離子聚合物，非常容易結(jié)合于高電荷陰離子基質(zhì)。工業(yè)應(yīng)用上，線(xiàn)性化PEI可改善負(fù)電荷染料的物理外觀，以調(diào)整染料的化學(xué)特性和增強(qiáng)染料與固相基質(zhì)的黏附能力，常用作黏附增強(qiáng)劑，作用同多聚賴(lài)氨酸（poly-lysine）；科研應(yīng)用上，線(xiàn)性化PEI能與DNA或其他負(fù)電荷生物大分子簡(jiǎn)單結(jié)合，正是這一特性，使得成為一種非常行之有效的載體運(yùn)輸介質(zhì)（Vector carrier），即轉(zhuǎn)染試劑。

線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI 25000（Polyethylenimine Linear, MW 25000）是一款優(yōu)秀、低成本、值得信賴(lài)的瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染試劑。在HEK293和CHO表達(dá)系統(tǒng)中，PEI在寬廣的生產(chǎn)規(guī)模內(nèi)（從96孔板到100L生物反應(yīng)器）能提供連續(xù)性的高基因表達(dá)。

本品是PEI 25K的無(wú)菌溶液，濃度為1mg/ml，直接使用即可。按照DNA：PEI 25K=1：3的比例來(lái)操作，1ml本品足以用來(lái)轉(zhuǎn)染330μg DNA，或者，6孔板內(nèi)約做80-160次轉(zhuǎn)染。

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃保存，1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1）收到本品或第一次使用，請(qǐng)根據(jù)單次用量分裝后置于-20℃凍存，盡量降低反復(fù)凍融次數(shù)。

2）本品為無(wú)菌溶液，請(qǐng)操作過(guò)程中執(zhí)行無(wú)菌操作。

3）請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量的無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過(guò)260 nm光吸收測(cè)定DNA濃度，260nm / 280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。

4）使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。

5）對(duì)于某些類(lèi)型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高重組蛋白的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為60-80%。

6）對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。

7）推薦用商業(yè)化的無(wú)血清培養(yǎng)基比如Opti-MEM I來(lái)稀釋DNA和PEI 25K，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物。

8）轉(zhuǎn)染過(guò)程請(qǐng)不要使用抗生素。

9）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

一、操作方法（貼壁細(xì)胞）

1.1鋪板

a）轉(zhuǎn)染前18-24h進(jìn)行鋪板，調(diào)整合適的細(xì)胞密度（參考表1），使其在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)60-80%。

【注意】：高血清水平會(huì)抑制轉(zhuǎn)染效率，大多數(shù)情況，低血清水平（≤5%）能產(chǎn)生最高的轉(zhuǎn)染效率。

1.2轉(zhuǎn)染步驟（以6孔板的單孔為例）

a）轉(zhuǎn)染前1-2h，每孔替換為3ml含2%血清的新鮮生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

b）制備PEI 25K-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物（嚴(yán)格按照以下步驟進(jìn)行）：①往300μl無(wú)血清培養(yǎng)基（比如：Opti-MEM I）加入2μg質(zhì)粒DNA,低速混合/渦旋均勻；②往混合物內(nèi)加入8μl PEI 25K（1mg/ml）（DNA/PEI 25K=1：4），低速渦旋5s；③無(wú)菌環(huán)境，室溫靜置30min以形成PEI 25K-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物。④用移液槍上下吹打3次，輕輕混勻。

c）將PEI 25K-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物轉(zhuǎn)到孔內(nèi)。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微渦旋，使得復(fù)合物分散均勻。

【注意】：以上步驟可通過(guò)調(diào)整PEI 25K-DNA復(fù)合物在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)的體積（為培養(yǎng)總體積的10%）來(lái)進(jìn)行放大或縮小（可參考表2）。

1.3 孵育

a）37℃，5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后12-18h，去除含PEI 25K-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液，更換新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

b）通常，轉(zhuǎn)染后36-48h能檢測(cè)到重組蛋白表達(dá)。一般在轉(zhuǎn)染后72-96h能觀察到最大水平的表達(dá)。

PEI 25K客戶(hù)使用案例（逐步增加中）

圖片描述：以人結(jié)腸癌細(xì)胞（HCT116）為對(duì)象，按照質(zhì)粒DNA：PEI 25000=1:4的比例制備轉(zhuǎn)染混合物并轉(zhuǎn)染進(jìn)入HCT116細(xì)胞，36h后于熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率（GFP，綠色熒光蛋白）。

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