MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit MTT

細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

產品簡介：

MTT也稱作溴化噻唑藍四氮唑，是一種黃色染料，已經廣泛替代傳統的臺盼藍染色法或者放射性同位素插入法，用來檢測細胞活力、細胞增殖以及毒性分析。MTT是一種可接受氫離子的化合物染料，帶正電荷，具有細胞膜滲透性。活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源進入的MTT還原成為水不溶性的藍紫色MTT-甲臜結晶，而死細胞不具此功能。甲臜結晶不能穿透細胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞內。在特定溶劑的作用下完全溶解甲臜結晶，然后通過酶標儀測定570 nm附近的吸光度。細胞增殖越多，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

本MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）采用獨特的甲臜溶解液，能夠非常好的完全甲臜結晶，使檢測本底低、靈敏度高，且線性范圍寬。

保存條件: 

-20℃避光保存，1年有效。MTT溶液（5mg/ml）第一次使用亦可根據需要分裝后-20℃避光保存；甲臜溶解液亦可室溫保存。

產品組成：

產品使用：（以96孔板為例）

1. 收集對數生長期的細胞，用含血清的培養液配制成單細胞懸液，調整細胞密度，以每孔3000-10,000個細胞接種到96孔板，每孔體積100μl，培養板的邊緣孔用無菌PBS填充。設置空白孔和對照孔。

【注①】：通常情況，細胞增殖實驗每孔加3000個細胞，細胞毒性實驗每孔加6000個細胞。具體每孔所用細胞數目，需根據細胞大小、增殖速度的快慢等來決定。

【注②】：需設置空白孔（不含細胞，含培養液、MTT和甲臜溶解液），對照孔（含細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT和甲臜溶解液），每組設置3個復孔。

2. 37℃，5% CO₂繼續培養或根據實驗具體需求進行培養，一般培養6-24h。

3. 根據實驗具體需求，給予0-20μl干預藥物處理，37℃，5% CO₂繼續培養至合適時間。

4. 小心吸掉培養液，每孔加入100μl新鮮培養液，再加入10μl MTT溶液（5 mg/ml），加樣時盡量勤換槍頭，控制加量誤差。繼續培養4h。

5. 小心吸掉培養液，每孔加入110μl甲臜溶解液，置搖床上低速振蕩10min，使得結晶物充分溶解?？稍诠鈱W顯微鏡下觀察結晶物是否完全溶解。如果紫色結晶較小或較少，溶解的時間會短些；如果紫色結晶較大或較多，溶解的時間會長些。

6. 在酶標儀上搖勻后，選擇570nm，測定吸光度。記錄結果，比色以空白調零。

【注①】：對于細胞毒性檢測，以未經藥物處理細胞的OD值為100%，然后計算藥物處理細胞所占的比率（x），公式如下：OD（未經藥物處理細胞）/OD（藥物處理細胞）=100%/x。然后建立直方圖。

注意事項：

1.      使用96孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發的問題。①由于96孔板周圍一圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS、無菌水或培養液；②可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方以緩解蒸發。

2.      MTT溶液在低溫下會凝固，請置于室溫或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后再使用。

3.      MTT溶液需盡量減少反復凍融的次數，若單次用量很少，建議根據需求分裝后置于-20℃保存。MTT溶液顏色如變為灰綠色，請勿使用。

4.      甲臜溶解液當置于-20℃保存需解凍使用，或室溫保存產生沉淀，可置于37℃水浴孵育以促進溶解，并且必須全部溶解后混勻使用。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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