Enhanced NaTrium Green-2 AM

(Replacement of Asante NaTrium Green-2 AM)

鈉離子指示探針

【溫馨提示】：見我司整理的鈉離子載體/探針（Sodium ionophores/indicators）產品專題。

【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內加載性。 

產品簡介：

Enhanced NaTrium Green-2 AM (ENG-2 AM)是Asante NaTrium Green-2 AM（ANG-2 AM）的替代物，是一種具細胞膜滲透性的新型鈉離子（Na+）熒光探針。一旦進入細胞后，經非特異性酯酶水解生成水溶性形式的探針。不同于傳統Na+探針SBFI，ENG-2是一種可見光光譜范圍的探針，激發波長范圍是488-525nm，發射波長是545nm。

ENG-2 AM具有容易加載、緩慢泄露、良好光穩定性和寬動力學范圍等理想特征，也正好彌補傳統Na+熒光探針SBFI AM（貨號：NBS7676）的缺陷。

產品特性：

1） 同義名：ENG-2 AM

2） 分子式：C53H60Cl2N2O18

3） 分子量：1084 g/mol

4） 純度：≥90%（HPLC）

5） 最大激發波長：525 ± 3 nm（Methanol）

6） 最大發射波長：545 ± 3 nm（Methanol）

7） 解離常數（Kd）：20mM（in the absence of K+）

8） 動力學范圍（Fmax/Fmin）：29

9） 溶解性：DMSO

10）化學結構圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，至少1年有效。

產品使用：

以下步驟僅做參考，具體請根據實際情況或參考文獻資料來調整。

1.1 使用無水DMSO溶解ENG-2 AM（Mw：1084 g/mol）配制成1-5mM儲存液，比如往50μg ENG-2 AM凍干粉內加入23μl DMSO，充分溶解后配制成2mM儲存液。-20oC分裝干燥凍存，避免反復凍融。

1.2 通常在含適當濃度AM探針的無血清培養基中實現探針加載。建議正式實驗前向加載培養基內加入Pluronic F-127以促進AM探針的分散。可用DMSO配置20% Pluronic F-127儲存液或其他濃度，只需在正式實驗前將其與ENG-2 AM儲存液混合，然后加入加載培養基，保證其終濃度＜0.1%（w/v）。

1.3 室溫或37℃孵育細胞（可能在室溫的探針加載質量會高些），孵育濃度通常為1-10μM，孵育時間通常為30-60min，具體的請根據實際情況或參考文獻資料。

1.4 【可選】對于大分子量AM探針（分子量≥1000g/mol），孵育結束，加入不含AM探針的細胞加載培養基額外孵育20-60min，以確保細胞將AM基團完全去酯化。

1.5 用不含血清和探針的培養基清洗細胞至少一次，以降低細胞外背景熒光。

1.6 最后用合適的儀器來檢測熒光信號。最大激發波長525nm，最大發射波長545nm。

【注意】：

a) 如果細胞加載培養基是以碳酸氫鈉為緩沖體系，那么加載需要含5% CO₂的環境內進行，以防止因CO₂損失引起的培養基堿化。

b) 如果細胞加載培養基含血清，那需適當提高AM探針工作濃度，以補償因AM探針與血清蛋白結合引起的損失。

c) 某些情況下，對分子量接近或超過1000的AM探針，需用不含AM探針的細胞加載緩沖液進一步孵育20-60min，以保證細胞內酯酶能充分降解AM基團。

d) 探針的加載時間和濃度因具體的細胞類型而有差異，請根據具體的細胞類型來優化。

e) 對每一種探針有必要通過校準（calibration）來得到實際解離常數（Kd）。物理條件如溫度，pH，離子強度或溶液粘度，以及探針與細胞組成成分如蛋白質的相互作用，都會影響Kd值。實際情況細胞內的Kd比體外溶液通常要高。因此，細胞水平研究有必要進行校準確認實際Kd值。

f)  對于ENG-2，雖然最大激發波長在525nm，但其極強的熒光亮度使其能夠用標準的488nm濾片來激發，與Fluo系列的可見光鈣離子指示探針檢測手段一致。值得注意的是，488nm激發下得到的熒光強度約為最大激發波長下的40%。

注意事項：

1.      ENG-2 AM易受潮，粉末需干燥保存。

2.      ENG-2 AM儲存液可用DMSO溶解，不推薦長期保存，甚至是-20oC。建議條件允許，最好現配現用。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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