Cell-Tracker Green CMFDA 活細胞示蹤探針（綠色）

【溫馨提示】：見我司整理的Cell-Tracker細胞示蹤/細胞追蹤熒光探針專題。

產(chǎn)品簡介：

Cell-Tracker熒光探針是用來監(jiān)測細胞運動、定位、增殖、遷移、趨化和侵襲的優(yōu)秀工具。

Cell-Tracker Green CMFDA，英文全名：5-chloromethylfluorescein diacetate，能自由穿透細胞膜進入細胞，在胞內轉化生成不具細胞膜滲透性的反應產(chǎn)物。該產(chǎn)物幾次傳代都能良好的保留在活細胞。在細胞群內，染料只會轉移到子代細胞，不會轉移到鄰近細胞。

Cell-Tracker Red CMTPX特地設計使其至少72h（典型有3~6代）能展示熒光，此染料表現(xiàn)出理想的示蹤特征：穩(wěn)定、工作濃度下無毒性、良好保留在細胞，且在生理pH下呈明亮熒光。另外，Cell-Tracker Red CMTPX的激發(fā)和發(fā)射光譜（492/517nm）與紅色熒光蛋白RFP很好的分開，適用于多重標記（見附表1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征）。

產(chǎn)品特性：

1）  CAS NO.：136832-63-8

2）  同義名：CellTracker? Green CMFDA; Spiro(isobenzofuran-1(3H),9'-(9H)xanthen)-3-one, 3',6'-bis(acetyloxy)-5-(chloromethyl)-;

3）  分子式：C25H17ClO7

4）  分子量：464.86 g/mol

5）  外觀：無色固體

6）  溶解性：溶于DMSO

7）化學結構圖：

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

產(chǎn)品使用：

1．細胞準備

在合適的培養(yǎng)基內培養(yǎng)細胞。貼壁細胞可以在含蓋玻片的培養(yǎng)皿內爬片生長，裝入足量的生長培養(yǎng)基。

2．操作步驟

以下描述的是將染料加到培養(yǎng)細胞以及在熒光顯微鏡下成像的步驟。各種因素，比如將染料加載到細胞或組織，可能都需根據(jù)特定的細胞類型對某些條件做出修改。

探針的最佳染色濃度需根據(jù)用途來調整。建議剛開展實驗需要測定至少1個10倍范圍內的濃度。一般來說，長期染色（≥3天）或使用快速分裂的細胞需5-25μM的染料。對于短期實驗（比如活力測定），使用低濃度染料（0.5-5μM）。為了維持正常的細胞形態(tài)和降低潛在的偽影，盡可能使用低濃度的染料。

2.1制備Cell-Tracker染色工作液

① 開瓶前將產(chǎn)品從冰箱取出，放到室溫使其回溫至少20min。

② 用高質量的無水DMSO溶解粉末使其濃度為10mM。例如，對1mgCell-Tracker Green CMFDA（MW:464.86g/mol）凍干粉，加入215μlDMSO充分溶解，即得到10mM母液。

③ 用無血清培養(yǎng)基稀釋母液到0.5-25μM的工作濃度。預熱染色工作液到37℃。

2.2懸浮細胞染色步驟

① 離心收集細胞，吸掉上清液。用預熱的Cell-Tracker染色工作液輕輕的重懸細胞。

② 在適合特定細胞類型的生長條件下孵育15-45min。

③ 離心細胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入選擇的培養(yǎng)基，將標記好的細胞分配到載玻片或到選擇的培養(yǎng)器皿內。

⑤ 根據(jù)附表1選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長的濾片來進行成像檢測。

2.3貼壁細胞染色步驟

① 吸走培養(yǎng)基。

② 輕輕加入預熱的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在適合特定細胞類型的生長條件下孵育15-45min。

④ 吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入選擇的培養(yǎng)基。

⑥ 根據(jù)表1選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長的濾片來進行成像檢測。

3．熒光顯微鏡觀察

Cell-Tracker熒光探針可用帶標準光學和圖像增強的各種落射熒光光學顯微鏡檢測。根據(jù)染料選擇合適的濾片。見附表1 Cell-Tracker熒光探針的光譜特征。

表1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征

注意事項：

1.      熒光染料都存在淬滅的問題，保存和操作過程中注意避光。

2.      避免使用含氨基和巰基的緩沖液。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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