FeRhoNox-1 (Fe²⁺ indicator) 亞鐵離子熒光探針  

產(chǎn)品簡介：

FeRhoNox-1，也稱為RhoNox-1，是一種活躍的熒光探針，特異性檢測不穩(wěn)定的鐵(II)離子（Fe²⁺）。一旦與Fe²⁺反應(yīng)后，不可逆的生成一種橙色（紅色）熒光產(chǎn)物（Absmax

=540nm，FLmax=575nm，圖1.FeRhoNox-1的光譜特征）。生理濃度下的鐵（III）離子（Fe³⁺）或其它除鐵離子以外的二價(jià)金屬離子都不會(huì)使其熒光增強(qiáng)（見圖2 FeRhoNox-1的選擇性）.FeRhoNox-1的反應(yīng)特異性）。FeRhoNox-1具細(xì)胞膜滲透性和高選擇性，適用于活細(xì)胞內(nèi)Fe²⁺的檢測，傾向定位在高爾基體。

圖1. FeRhoNox-1的光譜特征。FeRhoNox-1與Fe²⁺反應(yīng)后吸收和發(fā)射光譜（上）。FeRhoNox-1在37℃，與Fe²⁺反應(yīng)1h后，熒光明顯增強(qiáng)。最大熒光峰約在575nm。

圖2. FeRhoNox-1的選擇性。FeRhoNox-1僅與Fe²⁺反應(yīng)。

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

產(chǎn)品使用：

1. 需要自行準(zhǔn)備的材料

1.1細(xì)胞培養(yǎng)級或超純DMSO【強(qiáng)烈建議將高純的DMSO分裝成單次用量保存在極低溫冷凍室內(nèi)，比如-80℃，避免吸潮。降解的DMSO可能會(huì)增加FeRhoNox-1的背景信號】

1.2合適的清洗和觀察緩沖液（比如：PBS, pH 7.4；HBSS；等）。注意：不要含酚紅。

2. 探針準(zhǔn)備

2.1從冰箱取出FeRhoNox-1，置于室溫回溫至少30min，將其置于微量離心機(jī)內(nèi)低速離心。將瓶內(nèi)的粉末離心到管底后，再開蓋。

2.2往一管FeRhoNox-1（50μg）內(nèi)加入109μl高質(zhì)量DMSO，用槍反復(fù)吹吸5次或以上，使其完全溶解即得到1mMFeRhoNox-1儲存液。建議單次用完儲存液，若實(shí)在用不完，請根據(jù)單次用量分裝，置于-80℃避光保存。用中性緩沖液來稀釋儲存液。

2.3于正式實(shí)驗(yàn)前，用HBSS或其他中性緩沖液來稀釋1mMFeRhoNox-1儲存液到所需工作濃度（比如：5μM），工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，盡快用完。【注意：酸性溶液會(huì)氧化FeRhoNox-1，嚴(yán)重影響探針的效率】。

3. 染色步驟

3.1 從玻璃底培養(yǎng)皿上培養(yǎng)的細(xì)胞中吸掉培養(yǎng)液。
3.2 吸掉上清液，用 HBSS 清洗細(xì)胞 2 次。
3.3 加入含 5μM FeRhoNox-1 的染色工作液，于 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱中孵育 60min。
3.4 在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。

4. 熒光檢測

對于熒光激發(fā)：通用的綠色激發(fā)濾片比如Cy3或四甲基羅丹明（TMR）檢測用的濾片。

對于激光激發(fā)：532nm或543nm激光器比較適合。發(fā)射波長為570nm左右。

附錄F eRhoNox-1的染色示例

I. HepG2細(xì)胞

圖3. FeRhoNox-1在HepG2活細(xì)胞內(nèi)的成像檢測。

①-Fe(II)：細(xì)胞未添加亞鐵離子（100μM硫酸亞鐵銨）；

②+Fe(II)：細(xì)胞加載亞鐵離子；

③+Fe(II)+Bpy：細(xì)胞加載亞鐵離子，之后用加入鐵離子螯合劑Bpy。圖②熒光增強(qiáng)，而圖③熒光降低。此結(jié)果與FeRhoNox-1特異性檢測Fe(II)的特征一致。

注意事項(xiàng)：

1.      FeRhoNox-1傾向定位在高爾基體，但也可能檢測細(xì)胞質(zhì)池內(nèi)的Fe²⁺，目前針對這一點(diǎn)未做明確評估。

2.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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