FeRhoNox-1 (Fe²⁺ indicator) 亞鐵離子熒光探針  

產品簡介：

FeRhoNox-1，也稱為RhoNox-1，是一種活躍的熒光探針，特異性檢測不穩定的鐵(II)離子（Fe²⁺）。一旦與Fe²⁺反應后，不可逆的生成一種橙色（紅色）熒光產物（Absmax

=540nm，FLmax=575nm，圖1.FeRhoNox-1的光譜特征）。生理濃度下的鐵（III）離子（Fe³⁺）或其它除鐵離子以外的二價金屬離子都不會使其熒光增強（見圖2 FeRhoNox-1的選擇性）.FeRhoNox-1的反應特異性）。FeRhoNox-1具細胞膜滲透性和高選擇性，適用于活細胞內Fe²⁺的檢測，傾向定位在高爾基體。

圖1. FeRhoNox-1的光譜特征。FeRhoNox-1與Fe²⁺反應后吸收和發射光譜（上）。FeRhoNox-1在37℃，與Fe²⁺反應1h后，熒光明顯增強。最大熒光峰約在575nm。

圖2. FeRhoNox-1的選擇性。FeRhoNox-1僅與Fe²⁺反應。

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

產品使用：

1. 需要自行準備的材料

1.1細胞培養級或超純DMSO【強烈建議將高純的DMSO分裝成單次用量保存在極低溫冷凍室內，比如-80℃，避免吸潮。降解的DMSO可能會增加FeRhoNox-1的背景信號】

1.2合適的清洗和觀察緩沖液（比如：PBS, pH 7.4；HBSS；等）。注意：不要含酚紅。

2. 探針準備

2.1從冰箱取出FeRhoNox-1，置于室溫回溫至少30min，將其置于微量離心機內低速離心。將瓶內的粉末離心到管底后，再開蓋。

2.2往一管FeRhoNox-1（50μg）內加入109μl高質量DMSO，用槍反復吹吸5次或以上，使其完全溶解即得到1mMFeRhoNox-1儲存液。建議單次用完儲存液，若實在用不完，請根據單次用量分裝，置于-80℃避光保存。用中性緩沖液來稀釋儲存液。

2.3于正式實驗前，用HBSS或其他中性緩沖液來稀釋1mMFeRhoNox-1儲存液到所需工作濃度（比如：5μM），工作液需現配現用，盡快用完。【注意：酸性溶液會氧化FeRhoNox-1，嚴重影響探針的效率】。

3. 染色步驟

3.1 從玻璃底培養皿上培養的細胞中吸掉培養液。
3.2 吸掉上清液，用 HBSS 清洗細胞 2 次。
3.3 加入含 5μM FeRhoNox-1 的染色工作液，于 37℃，5% CO2 培養箱中孵育 60min。
3.4 在熒光顯微鏡下觀察細胞。

4. 熒光檢測

對于熒光激發：通用的綠色激發濾片比如Cy3或四甲基羅丹明（TMR）檢測用的濾片。

對于激光激發：532nm或543nm激光器比較適合。發射波長為570nm左右。

附錄F eRhoNox-1的染色示例

I. HepG2細胞

圖3. FeRhoNox-1在HepG2活細胞內的成像檢測。

①-Fe(II)：細胞未添加亞鐵離子（100μM硫酸亞鐵銨）；

②+Fe(II)：細胞加載亞鐵離子；

③+Fe(II)+Bpy：細胞加載亞鐵離子，之后用加入鐵離子螯合劑Bpy。圖②熒光增強，而圖③熒光降低。此結果與FeRhoNox-1特異性檢測Fe(II)的特征一致。

注意事項：

1.      FeRhoNox-1傾向定位在高爾基體，但也可能檢測細胞質池內的Fe²⁺，目前針對這一點未做明確評估。

2.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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