Magneti-G 外泌體親和純化試劑盒

產品介紹

1 Magneti-G商標

Magneti-G商標來自磁性（Magnetic）的英文諧音，G為高聚物的縮寫，因此帶有這一商標的產品，均為高聚物材質的磁性微球。后續將根據客 戶的需求，基于 Magneti-G磁珠開發更多相關產品。

2 外泌體功能介紹

外泌體和其他細胞外囊泡（EVs）屬于細胞膜囊泡，包含蛋白，mRNA，microRNA，DNA和脂類。外泌體直徑 30-150nm，多種細胞在正常及病 理狀態下均可分泌外泌體，其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中，且外 泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。外泌體具有多種多樣的功能，其功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與 到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、腫瘤侵襲等。

3 外泌體的形成過程

膜雙層通過磷脂的不對稱分布來維持脂質的“多面性”。外膜富含磷脂酰膽堿和鞘磷脂，而內膜主要由磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine，PS)和磷脂酰乙醇胺形成。微泡由質膜出芽形成，主要原因是由于 Ca2+通過磷脂雙分子層破壞了膜的不對稱性，導致磷脂跨膜雙層的重新分配， 促進膜起泡，最終導致出芽過程的進行，出芽形成芽泡，將泡體中的外泌體釋放到細胞外，這樣就形成了一個完整的外泌體。

4 試劑盒組份

Magneti-G外泌體親和純化試劑盒將外泌體結合蛋白定向偶聯至高聚物磁珠上，采用親和純化的方法進行外泌體的純化，該方法可以很方便 獲得高純度的外泌體。該試劑盒利用中性 pH的洗脫液，很溫和的將捕獲的 EVs從磁珠上洗脫下來，可以獲得完整的外泌體，純化的完整外泌 體和其他 EVs可用于不同實驗，包括 WB檢測，電鏡分析，納米粒子追蹤分析，納米流式等。

5 磁珠性質

高聚物磁珠采用高分子聚合技術將超順磁性材料和高分子材料完美地結合在一起，具有更快的磁響應性同時保持微球良好的分散性、極低的非特異性吸附和更豐富的結合位點，已被廣泛應用于免疫分析、核酸分離提取、細胞分選、酶的固定等多個領域。Magneti-G Exosome Affinity Beads是利用共價修飾的方法將外泌體結合蛋白偶聯至高聚物磁珠上，純化方法簡單、高效便捷。

6 樣本選擇

Magneti-G外泌體親和純化試劑盒適用于多種樣本的外泌體純化，我們測試過培養基上清、血清、血漿以及尿液樣本，都有非常好的外泌體純化效果，但植物外泌體沒有進行測試，客戶如有需求可自行檢測。

使用方法

1 樣品預處理

取待純化的樣品進行差速離心，首先用 300g離心 10min，繼續收集上清，再用 2000g離心 10min，最后用10000g再離心 10min，將收集的 上清用 0.22μm的濾膜進行過濾處理（可選），如果樣本體積較大可以配套使用本公司外泌體快速純化試劑盒進行濃縮，濃縮方法參考外泌體 快速純化試劑盒說明書，隨后在上清中加入 5%（V/V）樣品體積的 Exosome-Binding Buffer，上下顛倒混勻。

2 磁珠預處理

本產品用于外泌體純化制備的實驗，1ml磁珠能夠處理不超過 50ml體積的樣本，載量≥109 particles/ml，可根據樣品中外泌體的含量的預 估加入對應體積的磁珠，也可以直接取 1ml的磁珠與 30-50 ml樣本（不含 Exosome-Binding Buffer體積）與孵育進行實驗，后續可根據初步實驗的數據進行修正。取出計算好的磁珠置于磁力架上，待磁珠完全吸附后棄去保存緩沖液，用 Exosome-Wash Buffer清洗5次，1ml磁珠加入1ml Exosome-Wash Buffer，注意讓磁珠盡量全部吸附，吸取的時候盡量不要吸到磁珠，磁珠損失會影響載量。

3 孵育和洗雜

將處理過的 Magneti-G Exosome Affinity Beads加至樣品中在4℃搖晃孵育1-2h，隨后將磁珠置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附后吸去 上清，加入一定體積的 Exosome-Wash Buffer輕輕顛倒混勻 3-5次，再將懸液置于磁力架上，同樣待磁珠完全吸附在離心管壁后吸棄上清， 重復5次，1ml磁珠加入1ml Exosome-Wash Buffer。

4 樣品洗脫

洗脫 Buffer選用Exosome-Elution Buffer，進行 3-4次分管洗脫，1ml磁珠加入 0.5ml洗脫液進行搖晃洗脫，每次洗脫時間 5min，搖晃要盡量輕柔，防止外泌體在洗脫過程中破碎。

5 外泌體保存與應用

將收集的外泌體溶液保存于-20℃或-80℃冰箱中，盡量避免反復凍融，可分裝以備下游檢測和應用。如需無菌培養，可使用0.22μm無菌過濾器進行過濾收集。

注意事項

1) 本產品保存在 2-8℃冰箱中，不要凍結保存；

2) 本產品出現輕微團聚屬正常現象，可正常使用；

3) 外泌體較脆弱，建議盡量在低溫下進行操作，防止外泌體活性受損，影響下游實驗；

4) 提取的外泌體保存在-20℃或-80℃中，可保存半年時間，外泌體分裝使用，盡量避免反復凍融；

5) 樣本中不要含有金屬離子螯合劑。

參考信息

293細胞外泌體純化：

1) 取30ml培養基上清，差速離心去除顆粒沉淀，加入 5%的 Exosome-Binding Buffer；

2) 加入1ml已經清洗過的磁珠，混合均勻后放置振蕩器上，室溫孵育1h；

3) 將含有磁珠的樣品管轉移到磁力架上，分離磁珠和液體，用移液器吸走上清，留下磁珠；

4) 用 Exosome-Wash Buffer清洗 5次后加入 Exosome-Elution Buffer，每次洗脫孵育 5 min，重復洗脫三次；

5) 對洗脫產物進行標志物蛋白的 WB檢測、納米流式檢測以及電鏡檢測，

常見問題與解答

1 如何快速鑒定純化后的產物是否含有外泌體？

1) 直接裂解洗脫樣本，通過吸光值、BCA或者 Bradford檢測下蛋白濃度，通常外泌體的獲取量和蛋白濃度呈現正相關；

2) 外泌體檢測最直接的方式是仍然是 WB檢測，外泌體的幾個特征性標志物 CD9、CD63、CD81、TSG101和 HSP70等，通常 WB選用 2-3個特異性蛋白進行 WB檢測可初步判斷樣品中是否含有外泌體。

2 為何洗脫后的樣本中不含有外泌體或含量低于正常值？

1) 可能是樣本中所產生的外泌體較少，適當擴大預處理的樣本容量，并排除培養過程中因活率過低或其它原因導致的外泌體污染；

2) 雖然看不見但可以結合下游實際需求進一步分析，可組合其它的檢測方法如 WB、納米流式等進行輔助驗證；

3) 在實際提取分離過程中是否嚴格按照說明書要求進行分離純化，排除是否因操作不當造成樣本的流失；

4) 根據所提取樣本的特性而定，提取本試劑盒推薦來源以外的外泌體時，并不能夠保證提取效率與從 293細胞培養基上清中提取效率相當， 但仍需盡可能保證 4℃的條件下進行，排除外泌體降解的可能以及樣本來源差異。

3 如何長時間保存外泌體洗脫液？

1) 外泌體會降解不推薦長時間保存，如果不得以需要長期儲存，建議在-20℃或-80℃下保存最長不超過 30天，若在 4℃下儲存最長不超過 7 天；

2) 注意分裝，避免反復凍融。

4 外泌體分離方法哪種方式最好？

1) 沒有最好的方法，主要根據實驗需求而定，本款試劑盒的最大特點就是比傳統的超速離心法更快，且對設備的依賴性更低；

2) 有條件的情況下可以嘗試多種方式組合提取。

保存與運輸

運輸：冰袋運輸，不可凍結。

保存：2-8 ℃冷藏保存，不可凍結。