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<M1041-M1042> DNA Marker 50bp ladder

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DNA Marker 50bp ladder(M1041-M1042)
  • DNA Marker 50bp ladder(M1041-M1042)

<M1041-M1042> DNA Marker 50bp ladder

50bp ladder
M1041,60次
M1042,60次×3
品牌:東盛
價(jià)格: 234.00~572.00
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M1041 M1042

50bp ladder

M1041/M1042

60/60×3
DNA Marker 50bp ladder(M1041-M1042).png

建議上樣量

3-5 μl/次。可根據(jù)上樣孔大小選擇合適上樣量。

50bp ladder已預(yù)混上樣緩沖液,可直接進(jìn)行電泳分析。

 

建議電泳條件

8 cm  3 %瓊脂糖凝膠,

0.5×TBE5 V/cm1 h

 

保存

常溫保存3個(gè)月,長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃

 

各條帶含量

指示帶     100 ng/5μl

非指示帶   40 ng/5μl

 

產(chǎn)品說明

50bp ladder8條雙鏈線狀DNA片段混合而成,適用于確定50 bp500 bp的線性雙鏈DNA片段大小,指示帶為250 bp,便于電泳后觀察。每條帶都通過嚴(yán)格的物理定量可用于測(cè)定目的片段的大小和含量

產(chǎn)品濃度為76 ng/μl

 

條帶組成(bp

50100150200250300400500

 

注意事項(xiàng)

 請(qǐng)選擇高品質(zhì)的瓊脂糖,并及時(shí)更換電泳緩沖液。溶膠不充分會(huì)導(dǎo)致因膠濃度不均而出現(xiàn)電泳條帶異常;陳舊的緩沖液離子緩沖能力不足,可能導(dǎo)致Marker條帶泳動(dòng)緩慢,并伴隨彌散現(xiàn)象。

 膠濃度、電壓、電泳時(shí)間是影響DNA片段分離的主要因素,為獲得最佳電泳分離效果,建議按照東盛推薦的條件進(jìn)行電泳分析。

 上樣量的多少取決于樣品的濃度與加樣孔的大小。由于東盛Marker的濃度較高,通常對(duì)于寬3mm(厚0.75-1mm)的加樣孔,建議上樣2-3 μl,對(duì)于寬5mm(厚0.75-1.5mm)的加樣孔,建議上樣4-6 μl。過多的上樣量可能導(dǎo)致條帶相互擠壓,分散不充分,跑不開,影響條帶分離效果。

 使用本產(chǎn)品進(jìn)行定量分析時(shí),可將目的片段做梯度上樣,選擇亮度與Marker條帶最為接近的片段進(jìn)行分析。

 進(jìn)行PAGE膠電泳分析時(shí),建議取0.5-1 μl Marker并用1×loading buffer稀釋到適當(dāng)體積上樣。


Q&A

  對(duì)于非變性凝膠電泳,Marker是否需要DNA變性?

答:本公司Marker產(chǎn)品中只有Lambda DNA Marker為質(zhì)粒酶切產(chǎn)物,在電泳上樣前如加熱處理可獲得最佳效果,其余產(chǎn)品均不需點(diǎn)樣前加熱處理;另外電壓太高也會(huì)使凝膠過熱和DNA變性造成帶型異常。

 

  當(dāng)DNA停留在凝膠點(diǎn)樣孔處時(shí)該怎么辦?

答:檢查膠濃度是否在適合分離DNA片段的范圍,點(diǎn)樣孔是否高質(zhì),確保電泳的正負(fù)極正確,檢查電泳緩沖液是否具有緩沖能力,確保DNA樣品的純度,如進(jìn)行PCR產(chǎn)物的純化,確保樣本中沒有或只存在少量的DNA結(jié)合蛋白或其他可與DNA結(jié)合的化合物。

 

  為什么DNA條帶不理想?

答:影響電泳條帶的因素很多,如凝膠種類或濃度不合適,質(zhì)量不佳;上樣量過多或過少;樣本的純度不高,鹽濃度過高;電泳緩沖液緩沖能力不足,有核酸酶污染;電泳條件不正確;染色不充分或不均勻;跑膠后沒有及時(shí)拍照。

 

  為什么定量數(shù)據(jù)不正確以及如何準(zhǔn)確定量樣品?

答:樣品和Marker的上樣條件不同,參考條帶不正確,凝膠的不均勻染色或背景過高都會(huì)干擾凝膠定量結(jié)果。樣品DNAMarker DNA在電泳前選用相同的上樣染料處理,調(diào)整樣品濃度,使其在凝膠中的含量與分子量最接近標(biāo)準(zhǔn)DNA條帶,樣品DNAMarker的上樣體積盡量接近,樣品用1×上樣緩沖液稀釋;定量時(shí)以分子量最接近的標(biāo)準(zhǔn)條帶為參照物,分析樣品條帶的含量;利用凝膠圖像分析軟件,如SensiAnsys可對(duì)DNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量,比目測(cè)條帶方法更精確。

 

  為什么在變性聚丙烯酰胺/尿素凝膠里電泳時(shí)會(huì)出現(xiàn)雜帶?

答:一般來說,雙鏈DNA Marker不推薦用于變性電泳,否則會(huì)產(chǎn)生非正常帶型,即出現(xiàn)所謂的雜帶。這種出現(xiàn)異型帶的現(xiàn)象,在100 bp以下的條帶極易發(fā)生。當(dāng)您的實(shí)驗(yàn)不可避免的要使用變性聚丙烯酰胺/尿素凝膠進(jìn)行電泳時(shí),我們建議,將樣品和Marker選用同樣的變性上樣緩沖液進(jìn)行變性處理后上樣,以消除二級(jí)結(jié)構(gòu)。

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