5(6) -羧基熒光素琥珀酰亞胺酯

5/6-FAM SE (NHS-Fluorescein, FITC-NHS)

產(chǎn)品簡介：

NHS-Fluorescein（NHS-熒光素，FITC-NHS），別名：5/6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（5/6-carboxyfluorescein succinimidyl ester,5/6-FAM SE），是一種熒光素染料的胺反應(yīng)性衍生物，具有廣泛的分析應(yīng)用，可作為抗體和其他探針的標(biāo)記，用于熒光顯微鏡檢測、流式細(xì)胞分析和免疫熒光測定（如Western印跡和ELISA）。

NHS-Fluorescein（NHS-熒光素，FITC-NHS，5/6-FAM SE）通過琥珀酰亞胺酯（NHS酯）官能團(tuán)活化。與FITC（異硫氰酸熒光素）相比，在生物偶聯(lián)上表現(xiàn)出更多優(yōu)勢。首先，FAM形成的酰胺能更好耐受水解，其次，FAM對偶聯(lián)條件的要求更不嚴(yán)格且有更好的偶聯(lián)效率，生成的偶聯(lián)物穩(wěn)定性更突出。FITC標(biāo)記的核酸和多肽與對應(yīng)的FAM標(biāo)記產(chǎn)物比較，具有更快變質(zhì)的傾向。據(jù)發(fā)現(xiàn)，在絕大數(shù)的生物應(yīng)用中都能用FAM試劑來替代FITC試劑。

產(chǎn)品特性：

1）  CAS NO.：117548-22-8

2）  同義名：5(6)-FAM, SE;5(6)-FAM,NHS ester;5(6)-Carboxyfluorescein NHS ester (mixture of isomers), 5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester;5-(and-6)-Carboxyfluorescein, succinimidyl ester;FLUOS; 5 (6)-羧基熒光素N -羥基琥珀酰亞胺酯；NHS-熒光素（5/6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯）,混合異構(gòu)體；5/6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯；

3）  分子式：C₂₅H₁₅NO₉

4）  分子量：473.39

5）  熒光：λex 492 nm; λem 517 nm in DMF

6）  外觀：粉末

7）  溶解性：溶于DMSO、DMF

8）  純度：≥95%

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，2年有效。 

注意事項：

1.      5/6-FAM SE是5-FAM和6-FAM的異構(gòu)體混合物，這些異構(gòu)體的特性在激發(fā)和發(fā)射光譜方面無法區(qū)分。對于蛋白應(yīng)用，不需要分離特定異構(gòu)體。

2.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

SE化合物生物標(biāo)記的幾個考慮因素：

1） 溶劑

大多數(shù)情況下，SE化合物（反應(yīng)性染料）都是疏水性分子，需用無水DMF或DMSO作為溶劑。比如：5/6-FAM SE（Mw：473.39）需先溶于高質(zhì)量無水DMSO配制成≥1mg/ml的母液，之后加入反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行標(biāo)記實驗。強(qiáng)烈推薦新鮮配制母液和工作液，如果非要保存母液的話，請務(wù)必根據(jù)單次用量分裝，≤-20℃避光密封干燥保存，盡量在1個月內(nèi)用完。

2） 反應(yīng)pH

SE與胺的標(biāo)記反應(yīng)具非常強(qiáng)的pH依賴性。胺反應(yīng)化合物與非質(zhì)子化的脂肪胺反應(yīng)，包括：蛋白的末端胺，賴氨酸的ε-氨基。氨酰化通常在pH 7.5以上進(jìn)行。通過SE基團(tuán)的蛋白修飾通常在pH 7.5-8.5之間進(jìn)行，而異硫氰酸基團(tuán)需在pH 9.0-10.0之間才能獲得最佳的標(biāo)記效果。

3） 反應(yīng)緩沖液

緩沖液含游離胺（比如：Tris、甘氨酸和巰基化合物）必須避免，因為這些也是胺反應(yīng)試劑。銨鹽（硫酸銨或醋酸銨）普遍用于蛋白沉淀中，必須在進(jìn)行染料標(biāo)記之前去除。

比如：5/6-FAM SE進(jìn)行蛋白標(biāo)記，可選擇50mM硼酸鈉緩沖液（pH 8.5）作為反應(yīng)緩沖液。

4） 反應(yīng)溫度

大部分標(biāo)記反應(yīng)在室溫進(jìn)行，然而，對于某些特殊的標(biāo)記反應(yīng)可能需提高或降低溫度。