Exonuclease III 核酸外切酶 III

產品簡介：

Exonuclease III是一種核酸外切酶，該酶作用于雙鏈DNA，從3'-OH末端方向逐步切去單核苷酸。該酶最適底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于雙鏈DNA切刻位點產生單鏈缺口。由于對單鏈DNA無活性，因此該酶難以切割3'突出末端。3'到5'外切酶活性對底物的消化程度隨3'突出末端的長度而變化，四堿基或更長的突出末端難以被切割。這種特性可以用于生產特定方向的單鏈DNA，將線性化DNA設計成為一端為不切割末端（3'突出端），另一端則設計為易切割末端（平端或5'突出端），此時Exonuclease III將僅消化一條鏈。Exonuclease III也有RNase H、3'-磷酸酶和脫嘌呤/嘧啶-核酸內切酶活性。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

產品應用：

1. 單向嵌套缺失

2. 定點突變

3. 單鏈特異性探針的制備

4. 雙脫氧測序用單鏈底物的制備

反應條件：

1× Exo III Buffer，37℃孵育。

酶活定義：

一個酶活單位(U)的定義是以雙鏈DNA為底物在37℃下孵育30 min，生成1 nmol的酸可溶性物所需的酶量。

核酸內切酶污染：

Exonuclease III 與超螺旋DNA共同孵育后進行瓊脂糖凝膠電泳，超螺旋條帶無顯著降解。

使用方法：

1. 于冰上配置如下反應體系

2. 37℃孵育30 min；

3. 加入終濃度為11 mM的EDTA以停止反應；

4. 熱失活條件為70℃孵育30 min；

5. 建議采用以下步驟回收處理后的樣本： a. 使用 PCR 柱清潔； b. 進行瓊脂糖凝膠電泳，然后膠回收DNA； c. 進行苯酚 / 氯仿萃取，后使用乙醇沉淀。

注意事項：

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！