通用裂解液

Universal Lysis Buffer

產品介紹 

Universal Lysis Buffer（通用裂解液）是一種使用非常廣泛的，在非變性條件下裂解組織或細胞的裂解液，樣品包括動物、植物的細胞或組織， 以及細菌樣品。提取的蛋白樣品可用于PAGE，Western Blot，免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP）IP，免疫共沉淀（Co-IP）和pull-down等實驗。

1 裂解方式 

常見的裂解方法有兩大類，物理法與化學法。物理方法，例如超聲法、均質法、研磨法、凍融法等。化學方法，例如有機溶劑法、酸堿裂菌法、溶菌 酶消化法。化學方法的優勢在于不受體積的限制，可以處理微升級別樣品。其中，溶菌酶法對原核細胞和大多數真核細胞有較好的裂解效果。 酸堿裂菌法速度快、效率高，但條件劇烈不利于維持蛋白的天然構象，該法在核酸提取中應用最為廣泛。通用裂解液針對多種樣本，采用溫和 的表面活性劑，并添加蛋白保護劑進行裂解，保持原有的分子結構和蛋白間相互作用。

2 蛋白保護劑 

通用裂解液中含有甘油和多種蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，可以在裂解過程中保護蛋白的穩定性。磷酸酶抑制劑中包含了酸性、堿性以及 酪氨酸/絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶抑制劑。而蛋白酶抑制劑包含了金屬蛋白酶、氨肽酶以及絲氨酸/天冬氨酸/半胱氨酸抑制劑，代替了有毒的PMSF。

3 主要用途 

1）小量樣本的快速裂解，后續可用于小量誘導蛋白的可溶性鑒定、pull-down、IP/Co-IP等實驗。 

2）中量樣本的快速裂解，后續可用于蛋白純化、性質表征。

使用方法

1 提取細胞蛋白

貼壁或懸浮細胞 

1) 貼壁細胞：去除單層細胞的培養基后，用1×PBS漂洗2-3次（去除血清），然后加入胰酶消化（一般1~5min，有些細胞可能需要更長的時 間），使用血清或者含有血清的培養基終止消化，加入1×PBS重懸后，將細胞放至離心管中； 懸浮細胞：將細胞懸液以2000rpm，4℃離心5min，棄上清，收集細胞，用1×PBS輕柔漂洗一次。 

2) 4000rpm，4℃離心10min收集細胞，去除上清，收集沉淀；然后通過渦旋或者手指輕彈管底，分散底部的細胞。

3) 按照每5×106個CHO或293細胞加入1ml的通用裂解液重懸。 

4) 用移液槍吹打數下使裂解液和細胞充分接觸；冰浴或4℃處理15min，使細胞充分裂解。

原核細胞 

1) 取1ml（OD600在1.0-1.2之間）菌液4000rpm ，4℃離心10min，去除上清，用1×PBS重懸并清洗一遍。 

2) 再次4000rpm，4℃離心10min收集細胞，去除上清，收集沉淀；然后通過渦旋或者手指輕彈管底，分散底部的細菌。 

3) 加入200μl通用裂解液，輕輕渦旋以混勻，冰浴或4℃處理15min。

酵母細胞 

1) 使用貼壁酶、玻璃珠研磨等方式對酵母進行前處理（該步驟不可省略，可提高通用裂解液對酵母細胞的裂解效果）。 

2) 取 1ml酵母液4000rpm ，4℃離心10min，去除上清，用1×PBS重懸并清洗一遍。 

3) 4000rpm ，4℃離心 10min，去除上清，然后通過渦旋或者手指輕彈管底，分散底部的酵母。 

4) 加 入 200μl通用裂解液，輕輕渦旋以混勻，冰浴或4℃處理15min。

蛋白樣品收集 

1) 樣品充分裂解后，10000~14000×g離心3-5min，取上清。 

2) 進行后續的PAGE、WB、IP和Co-IP等實驗。

2 提取組織蛋白（植物或動物） 

1) 將新鮮組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中，漂洗數次，洗凈組織血跡，用濾紙吸干組織表面液體，然后將組織切成細小的碎片（該步驟可使 用液氮或玻璃珠研磨替代，裂解效果更佳）。 

2) 準備多個EP管，稱重并做好標記，將組織小塊放入EP管中，稱重，按照每20mg組織加入200μl裂解液的比例加入裂解液；如果裂解不 完全，可適當增加裂解液使用量（不超過兩倍用量）；如果需要較高濃度的蛋白樣品，可適當減少裂解液使用量（不低于1/2用量）。 

3) 冰浴或4℃處理15min。 

4) 10000~14000×g 離心3-5min，取上清，即可進行后續的PAGE、WB、IP和Co-IP等實驗。

注意事項 

1) 建議對裂解液進行分裝，盡量避免反復凍融；請在冰上或者4℃裂解樣品。 

2) 裂解得到的蛋白樣品含有干擾Bradford法檢測的物質，建議使用BCA法蛋白濃度檢測試劑盒測定蛋白濃度。 

3) 若裂解樣品粘稠，在無核酸處理方案的情況下，可稀釋裂解樣品。 

4) 裂解液中含有甘油與表面活性劑，不建議用透析袋的方法進行濃縮，可通過層析柱富集或降低裂解比例。 

5) 為了您的安全和健康，實驗過程中請穿實驗服并戴一次性手套進行操作。 

6) 本產品僅限科研使用。

保存條件

1) 本產品為單組分，短期內（60天）可放置于2-8℃保存，長期保存可凍存于-20℃一年，避免反復凍融。

2) 產品運輸溫度為2-8℃；可以在收到產品后，分裝凍存，復溶后需要混合均勻再使用。

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