酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）實(shí)驗(yàn)
雙抗體夾心法（測抗原），間接法（測抗體）競爭法測抗原
酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）實(shí)驗(yàn)
酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）雙抗體夾心法（測抗原）
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 |  圖1. 雙抗體夾心法測抗原示意圖 本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進(jìn)行測定，底物降解的量即為欲測抗原的量。 這種方法欲測的抗原必須有兩個(gè)可以與抗體結(jié)合的部位，因?yàn)槠湟欢艘挥诠滔噍d體上的抗體作用，而另一端則要與酶標(biāo)記特異性抗體作用。因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之類的抗原測定。我們用在霍亂腸毒素的測定。HbSAg及HbS的測定。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 血清 血漿 體液 |
| 試劑、試劑盒 | 碳酸鹽包被緩沖液 抗體球蛋白 吐溫 檸檬酸 硫酸 |
| 儀器、耗材 | 酶標(biāo)比色計(jì) 96孔板 移液槍 離心管 離心管盒 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一、包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度（1～10 ug /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時(shí)，貯存冰箱。 二、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。 三、每凹孔加入0.2 ml用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標(biāo)本，37℃作用1～2小時(shí)。 四、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。 五、加入0.2 ml用稀釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)記特異性抗體溶液，37℃作用1～2小時(shí)或由預(yù)試實(shí)驗(yàn)確定作用時(shí)間。 六、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。 七、加入0.2ml底物溶液于每個(gè)凹孔(OPD或OT)，室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4 ml底物加0.1 ml終止劑）。 八、加終止劑：每凹孔加2M H2SO4或2 M檸檬酸0.05 ml。 九、觀察記錄結(jié)果：目測或用酶標(biāo)比色計(jì)測定（OPD用492nm）OD值。 |
| 注意事項(xiàng) | 1.可溶性抗原或抗體吸附于固相載體而成為不溶形式，這是進(jìn)行酶標(biāo)記測定的基本條件。許多物質(zhì)可作為固相載體，如纖維素、交聯(lián)右旋糖苷、瓊脂糖珠、聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯及聚氯乙烯等等。但在ELISA中最常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反應(yīng)板及塑料管。 2.包被所用的抗原必須是可溶性的，而且要求是優(yōu)質(zhì)和穩(wěn)定的制劑，純度和免疫原性要高。如果不純，由于抗原中所含雜質(zhì)就會競爭固相載體上的有限位置，降低敏感性和特異性。此外還應(yīng)考慮到制備包被抗原不應(yīng)破壞其免疫學(xué)活性。 3.對某些抗原必須進(jìn)行提純，如病毒的組織培養(yǎng)和雞胚培養(yǎng)物以及病毒接種動物的臟器等，它們當(dāng)中存在著許多非抗原的蛋白質(zhì)，必須設(shè)法除去，常用梯度超速離心或親和層析法提純，不經(jīng)提純是不能使用的。 4.用最適稀釋度抗原，包被固相載體不僅經(jīng)濟(jì)，而且可以克服前帶現(xiàn)象。可通過棋盤滴定法進(jìn)行測定，但用單項(xiàng)滴定法更為簡便，其方法是將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板，再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌，再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)孵育洗滌后，加底物溶液顯色，終止反應(yīng)后分別測定OD值，選擇OD值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為最適包被濃度。一般總是要選擇那個(gè)OD值稍大于1.0，而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清OD值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的OD值有明顯差別。 5.抗原包被固相載體除濃度外，對時(shí)間、溫度、PH均有關(guān)系。溫度高（如37℃、45℃、或56℃），包被時(shí)間可縮短，溫度低可延長包被時(shí)間。但為了方便起見，通常采用4℃包被過夜，可使抗原吸附得更加完全且均勻。在用聚苯乙烯或聚乙烯微量反應(yīng)板或塑料管作固相載體時(shí)，在堿性條件下（如0.1 mol/L、PH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋抗原）4℃包被過夜較為合適。但在某些試驗(yàn)中，如用LPS或毒素蛋白包被時(shí)，用PH 7.2-7.4 PBS稀釋才是滿意的。包被特異蛋白質(zhì)的濃度為1-10 ug/ml，而對某些病原微生物抗原以5-20 ug/ml較為合適，但均應(yīng)通過滴定。 |
| 其他 | 一、ELISA的影響因素 1. 固相載體 可溶性抗原或抗體吸附于固相載體而成為不溶形式，這是進(jìn)行酶標(biāo)記測定的基本條件。許多物質(zhì)可作為固相載體，如纖維素、交聯(lián)右旋糖苷、瓊脂糖珠、聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯及聚氯乙烯等等。但在ELISA中最常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反應(yīng)板及塑料管。 由于微量反應(yīng)板所用試劑量少，操作方便，適合于大規(guī)模應(yīng)用。國產(chǎn)聚苯乙烯微量反應(yīng)板（上海塑料三廠出品）目前已大量應(yīng)用于ELISA測定，并且獲得了滿意的結(jié)果。但每批微量反應(yīng)板對抗原或抗體蛋白質(zhì)的吸附性能是有顯著差別的。實(shí)驗(yàn)證明，吸附效果似乎與塑料的類型及其表面性質(zhì)有關(guān)。特別是塑料制品在加工過程中因工藝不同或受其他因素的影響而造成吸附性能的極大差異，甚至完全喪失吸附能力。 因此，對每批制品在使用前，必須經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室鑒定，鑒定的方法和標(biāo)準(zhǔn)是對每批購置的微量反應(yīng)板或塑料管抽樣，用0.2 ug/ml純化的正常人IgG進(jìn)行包被，經(jīng)洗滌后加酶標(biāo)記抗人球蛋白進(jìn)行反應(yīng)，再經(jīng)孵育洗滌，加底物顯色終止反應(yīng)后，逐孔在酶標(biāo)比色計(jì)中測定其消光值、光密度（OD值）。一般認(rèn)為全板中每兩孔間OD值的誤差不超過10%為合格。如果中間孔與四周孔OD值相差太大，或者反應(yīng)板的這一邊與另一邊凹孔的OD值相差大，均不合格。此外，還要檢查陽性和陰性參考血清OD值是否有明顯差別。一般要求有10倍左右的差異為合格，微量反應(yīng)板或塑料管在使用前并不一定通過特殊處理。用蒸餾水沖洗即可應(yīng)用。 2. 抗原 在ELISA中，包被于固相載體表面的抗原或抗體的來源和制備方法對試驗(yàn)結(jié)果都有影響。包被所用的抗原必須是可溶性的，而且要求是優(yōu)質(zhì)和穩(wěn)定的制劑，純度和免疫原性要高。如果不純，由于抗原中所含雜質(zhì)就會競爭固相載體上的有限位置，降低敏感性和特異性。此外還應(yīng)考慮到制備包被抗原不應(yīng)破壞其免疫學(xué)活性。 經(jīng)試驗(yàn)證明，適用于其他血清學(xué)試驗(yàn)的抗原并非均適合用于ELISA法。因此，對某一疾病的診斷，必須通過實(shí)踐，才能選出適用的優(yōu)質(zhì)抗原。對大多數(shù)傳染病和寄生蟲病的血清學(xué)診斷中所用的抗原并非要求十分嚴(yán)格，一般能用于補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的可溶性抗原均可用于ELISA，例如超聲波抗原、凍融抗原、細(xì)菌的外膜抗原、脂多糖（LPS）、細(xì)菌的外毒素以及用表面活性劑(如SDS)所提取的抗原等，在作ELISA時(shí)，必須要有1-2種試劑、要求純化，但用表面活性劑提取的抗原在包被前必須透析除去表面活性劑，否則就不易吸附到固相載體上去。 此外，對某些抗原必須進(jìn)行提純，如病毒的組織培養(yǎng)和雞胚培養(yǎng)物以及病毒接種動物的臟器等，它們當(dāng)中存在著許多非抗原的蛋白質(zhì)，必須設(shè)法除去，常用梯度超速離心或親和層析法提純，不經(jīng)提純是不能使用的。在用特異性抗體包被固相載體時(shí)也要提純。用抗原或抗體蛋白包被固相載體時(shí)選擇的濃度要適當(dāng)。如濃度太高，則低效價(jià)抗體可能測不出來，或包被過量形成多層抗原吸附，故在操作過程中可能脫落從而降低敏感性和可重復(fù)性。 用最適稀釋度抗原，包被固相載體不僅經(jīng)濟(jì)，而且可以克服前帶現(xiàn)象。那么用多大濃度抗原進(jìn)行包被最為合適呢？可通過棋盤滴定法進(jìn)行測定，但用單項(xiàng)滴定法更為簡便，其方法是將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板，再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌，再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)孵育洗滌后，加底物溶液顯色，終止反應(yīng)后分別測定OD值，選擇OD值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為最適包被濃度。一般總是要選擇那個(gè)OD值稍大于1.0，而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清OD值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的OD值有明顯差別。 抗原包被固相載體除濃度外，對時(shí)間、溫度、PH均有關(guān)系。溫度高（如37℃、45℃、或56℃），包被時(shí)間可縮短，溫度低可延長包被時(shí)間。但為了方便起見，通常采用4℃包被過夜，可使抗原吸附得更加完全且均勻。在用聚苯乙烯或聚乙烯微量反應(yīng)板或塑料管作固相載體時(shí)，在堿性條件下（如0.1 mol/L、PH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋抗原）4℃包被過夜較為合適。但在某些試驗(yàn)中，如用LPS或毒素蛋白包被時(shí)，用PH 7.2-7.4 PBS稀釋才是滿意的。包被特異蛋白質(zhì)的濃度為1-10 ug/ml，而對某些病原微生物抗原以5-20 ug/ml較為合適，但均應(yīng)通過滴定。 |
酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）間接法（測抗體）
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 |
圖1：間接法測抗體示意圖 間接法首先用抗原包被于固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的，或者至少是極微小的顆粒，經(jīng)洗滌，加入含有被測抗體之標(biāo)本，再經(jīng)孵育洗滌后，加入酶標(biāo)記抗抗體，(對人的標(biāo)本來說即加酶標(biāo)抗人球蛋白IgG、IgM)，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色，底物降解的量，即為欲測抗體的量，其結(jié)果可用目測或用分光光度計(jì)定量測定，本法用同種抗原包被固相載體后，只要用一種酶標(biāo)記抗人球蛋白，即可作多種人的傳染病、寄生蟲病以及其他疾病的血清學(xué)診斷。如用酶標(biāo)記抗人IgM，則可用于早期診斷。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 血清 血漿 體液 |
| 試劑、試劑盒 | PBS 包被緩沖液 硫酸 檸檬酸 |
| 儀器、耗材 | 96孔板 酶標(biāo)比色計(jì) 移液槍 離心管 離心管盒 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一、包被抗原：用包被緩沖液稀釋抗原至最適濃度（5～20 ug/ml）各0.3 ml加于微反應(yīng)板每個(gè)凹孔中,4℃過夜或37℃水浴2～3小時(shí)，貯存冰箱。 二、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。 三、加被檢標(biāo)本：每凹孔加入用含有0.05%吐溫-20的稀釋緩沖液稀釋的被檢血清各0. 2ml，37℃，作用1～2小時(shí)。 四、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。 五、加入酶結(jié)合物：每凹孔加入稀釋緩沖液稀釋的酶結(jié)合物0.2 ml 37℃作用1～2小時(shí)。 六、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。 七、加入0.2 ml底物溶液于每個(gè)凹孔(OPD或OT)，室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4 ml底物加0.1 ml終止劑）。 八、加終止劑：每凹孔加2 M H2SO4或2 M檸檬酸0.05 ml。 九、觀察記錄結(jié)果：目測或用酶標(biāo)比色計(jì)測定（OPD用492nm）OD值。 |
| 注意事項(xiàng) | 1.應(yīng)注意分離血清時(shí)，血液要求放置室溫中凝固收縮，不宜置冰箱（4℃）中凝固，否則會使大部分IgM和少量IgG喪失活性。 2.為了使特異性結(jié)合的抗體量盡可能多，包被微量反應(yīng)板凹孔的抗原應(yīng)該稍微過量。 3.在孵育或洗滌過程中，已吸附的抗原可能有部份會從固相載體上被洗滌下來。從而使加入被檢血清中的特異性抗體以外的蛋白質(zhì)很可能會吸附到原來包被抗原凹孔的空白處，增加本底顏色，產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。 4.在稀釋劑及洗滌劑中加入各種保護(hù)性阻劑可用來抑制非特異性蛋白的競爭性吸附作用。 5.在稀釋劑和洗滌劑中所加的吐溫-20很重要。它不僅能消除非特異性的本底反應(yīng)，而且還可增加陽性標(biāo)本的敏感度，這可能與吐溫-20能分離所吸附的非特異性物質(zhì)有關(guān)。目前采用的洗滌劑為PH7.4 PBS（含0.2‰KCL）加0.05%吐溫-20，如無吐溫-20，也可用吐溫故-40或吐溫-60代替。但吐溫-80本底較高，不宜應(yīng)用。 |
| 其他 | 一、ELISA影響因素 1. 試驗(yàn)樣品 血清、血漿或其他體液，均可作為ELISA的試驗(yàn)樣品（標(biāo)本）。但應(yīng)注意分離血清時(shí)，血液要求放置室溫中凝固收縮，不宜置冰箱（4℃）中凝固，否則會使大部分IgM和少量IgG喪失活性。關(guān)于人血清在保存過程中抗體的穩(wěn)定性報(bào)導(dǎo)尚不多。但一般認(rèn)為作ELISA血清最好要新鮮，若要貯藏，必須少量分裝保存于低溫冰箱，并防止反復(fù)凍融。血漿可用肝素毛細(xì)管法采血，而血清可用濾紙片法采血。 被檢血清或血漿標(biāo)本，可用含保護(hù)性封阻劑（吐溫-20）或稱濕潤劑的緩沖液來稀釋。也可加入一些蛋白質(zhì)，如1%牛血清白蛋白等來稀釋。然后再加到已經(jīng)用抗原或抗體包被的固相載體中進(jìn)行孵育。此種被試標(biāo)本可作一系列稀釋度測定，也可用一個(gè)稀釋度測定。對于作某一個(gè)傳染病的診斷來說，最好先用一系列稀釋度作一批標(biāo)本測定，求出對診斷有意義的一個(gè)稀釋度（即測定劑量反應(yīng)曲線），然后用一個(gè)稀釋測定即可。最適稀釋度和孵育時(shí)間均需從實(shí)踐中摸索出來，對一般病原微生物所引起的傳染病的血清學(xué)診斷，以1：200稀釋度測定比較適當(dāng)，而試驗(yàn)標(biāo)本的(即含抗體)作用時(shí)間一般為室溫或37℃ 1-2小時(shí)。但現(xiàn)在對有些標(biāo)本（如流腦抗原）測定時(shí)，僅用37℃ 5分鐘。對單克隆抗體檢測也可縮短作用時(shí)間。 2. 洗滌劑與稀釋劑 為了使特異性結(jié)合的抗體量盡可能多，包被微量反應(yīng)板凹孔的抗原應(yīng)該稍微過量。但在孵育或洗滌過程中，已吸附的抗原可能有部份會從固相載體上被洗滌下來。從而使加入被檢血清中的特異性抗體以外的蛋白質(zhì)很可能會吸附到原來包被抗原凹孔的空白處，增加本底顏色，產(chǎn)生假陽性反應(yīng),這是限制ELISA特異性的一個(gè)因素。因此不少學(xué)者在稀釋劑及洗滌劑中加入各種保護(hù)性阻劑來抑制非特異性蛋白的競爭性吸附作用。已經(jīng)證明牛血清白蛋白（BSA）和吐溫-20有良好的封阻作用。其加入的量BSA為0.5%～1%；吐溫-20為0.05%。（有人曾經(jīng)比較了四種洗滌劑，結(jié)果認(rèn)為蒸餾水加0.05%吐溫-20或0.02 mol/L PBS（PH7.4）加0.05%吐溫-20都是良好的）。在一般的洗滌劑和稀釋劑中還加有NaN3防腐，但是用HRP制備酶結(jié)合物時(shí)則不能加NaN3，因NaN3能抑制HRP的活性，需要注意BSA加入洗滌劑或稀釋劑中雖可改善ELISA的結(jié)果觀察，但由于BSA比較昂貴，又不易得到，故也不是非加不可的。有人在洗滌劑中加入0.1%白明膠，2%免血清，有利于加強(qiáng)封阻作用。最近有人報(bào)告用PH7.4 0.02 mol/L Tris-Hcl緩沖液中加入0.05%吐溫-20作洗滌劑，效果很好，被檢血清和酶結(jié)合物的稀釋劑，可與洗滌劑相同，但不需加0.2‰的KCl。 在稀釋劑和洗滌劑中所加的吐溫-20很重要。它不僅能消除非特異性的本底反應(yīng)，而且還可增加陽性標(biāo)本的敏感度，這可能與吐溫-20能分離所吸附的非特異性物質(zhì)有關(guān)。目前采用的洗滌劑為PH7.4 PBS（含0.2‰KCL）加0.05%吐溫-20，如無吐溫-20，也可用吐溫故-40或吐溫-60代替。但吐溫-80本底較高，不宜應(yīng)用。（0.5 mol/L NaCL）和2%兔血清加入稀釋劑中，可提高特異性。 |
酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）競爭法測抗原
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 |  圖1：競爭法測抗原示意圖 本法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，我們把抗原和抗體吸附到固相載體表面的這個(gè)過程，稱為包被（Coated），也可叫做致敏。經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為我們所要測定的未知抗原的量。 這種方法所測定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，因此，對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點(diǎn)是快，因?yàn)橹挥幸粋€(gè)保溫洗滌過程。但需用較多量的酶標(biāo)記抗原為其缺點(diǎn)。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 血清 體液 血漿 |
| 試劑、試劑盒 | 包被緩沖液 抗體球蛋白 吐溫 檸檬酸 硫酸 洗滌緩沖液 |
| 儀器、耗材 | 96孔板 酶標(biāo)比色計(jì) 移液槍 離心管 離心管盒 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一、包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度（1～10 ug /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時(shí)，貯存冰箱。 二、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。 三、分2組，a組加酶標(biāo)記抗原和被檢抗原混合液0.2 ml，b組只加酶標(biāo)記抗原液0.2 ml，37℃作用1～2小時(shí)。（混合液可作成不同稀釋度） 四、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。 五、加入0.2 ml底物溶液于每個(gè)凹孔(OPD或OT)，室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4 ml底物加0.1 ml終止劑）。 六、加終止劑：每凹孔加2 M H2SO4或2 M檸檬酸0.05 ml。 七、用酶標(biāo)比色計(jì)測定a、b兩組OD值，并求出a、b、OD值的差數(shù)。 |
| 其他 | 一、影響ELISA的因素 1. 試驗(yàn)的重復(fù)性（精確度） 有二種方法來檢驗(yàn)試驗(yàn)的精確度：通常用變異系數(shù)來表示：1、幾個(gè)樣品用ELISA法同時(shí)進(jìn)行多次測定求出CV%；2、不同時(shí)間對不同操作者對某幾個(gè)樣進(jìn)行多次測定求出變異系數(shù)。CV是個(gè)體參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差與平均數(shù)的比率。 S / X ＝ CV ，CV應(yīng)低10%，不應(yīng)大于10～15%。 不論目測或分光光度計(jì)測定，均可作一個(gè)稀釋度或一系列稀釋度測定，一般常規(guī)診斷只用一個(gè)稀釋度判斷陽性或陰性就可以了，這樣比較方便，現(xiàn)在推薦傳染病的血清診斷用1：200一個(gè)稀釋度。有些需要精確定量的，可作一系列稀釋度測定。 記錄結(jié)果有下列幾種方法： 1、“+”或“-”：所有超過規(guī)定的OD值（如OD，0.4）的標(biāo)本均屬陽性，此規(guī)定OD值是根據(jù)事先測定大量陰性標(biāo)本所取得的，此規(guī)定值是陰性標(biāo)本的上限。或者以一組陰性標(biāo)本OD平均值加2～3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差作為陽性閾值。 2、直接以O(shè)D值來表示，如0.4、0.7、1.2，OD值越大，陽性反應(yīng)越強(qiáng)，但此數(shù)值是在固定實(shí)驗(yàn)條件下得到的結(jié)果，而且每次實(shí)驗(yàn)都要有參考標(biāo)本作對照。 3、以終點(diǎn)滴度表示：將標(biāo)本作連續(xù)稀釋，最高稀釋度能出現(xiàn)陽性反應(yīng)者（即OD值仍大于陽性閾值，即為該標(biāo)本的滴度。 4、以“比值表示：求出被檢標(biāo)本的OD值與一組陰性標(biāo)本OD值的比值，例如為陰性標(biāo)本的2倍或3倍，即為陽性，比值小于2.1而大于1.5為可疑，<1.5為陰性。 測定標(biāo)本OD值-空白OD值  陰性對照OD值-空白OD值 如在此測定時(shí)以空白校正“O”點(diǎn)。 5、以“單位”來表示：在測定被檢標(biāo)本的同時(shí)，再測定一個(gè)含已知單位數(shù)的陽性參考血清，用不同稀釋度作ELISA檢測后，以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，單位數(shù)為橫坐標(biāo)，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。以后可根據(jù)被檢標(biāo)本的OD值，從曲線上找出相應(yīng)的單位數(shù)，再乘于血清的稀釋倍數(shù)，即可得出被檢標(biāo)本的單位數(shù)。 作試驗(yàn)時(shí)的陰性參考血清最好不要顯色，否則會對結(jié)果判斷帶來困難，特別在目測時(shí)，當(dāng)陽性標(biāo)本OD值>2.0時(shí)，應(yīng)作適當(dāng)稀釋后再作測定。 2. 對使用儀器要求 所用儀器如吸管、燒杯試管都要清潔，用于酶結(jié)合和底物的吸管和容器一定要分開。試劑要求標(biāo)準(zhǔn)化。 |
公司名稱：上海諾寧生物科技有限公司
聯(lián)系地址：上海市閔行區(qū)虹梅南路2588號綠亮科創(chuàng)園A531
聯(lián)系電話：021-61241614 18616364863
聯(lián)系 Q Q：306458042（經(jīng)銷商）392324729（科研終端）
E-mail：noninbio@163.com
